Диагностика сибирской язвы

Цель занятия: изучить методы диагностики сибирской язвы. Материалы и оборудование: световой микроскоп, вакцина против сибирской язвы.

Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбудитель — Bacillus anthracis.

При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический анализ, клинические, патологоанатомические и лабораторные исследования.

Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных животных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососущих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов животных и стоячие водоемы.

Если болезнь возникла в период стойлового содержания животных, выясняют условия их кормления и происхождение кормов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обследуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, велись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления сибирской язвы в данной местности.

Клиническое обследование животных начинают с измерения температуры тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выражается также отказом от корма, резким припуханием лимфатических узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.

При патологоанатомическом исследовании отмечают характерные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенисто-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изменений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз устанавливают только после лабораторного исследования.

Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, биопробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.

Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с характерными патологоанатомическими изменениями. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.

Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сообщают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окрашивают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирующих антител.

В мазках, окрашенных по Граму, сибиреязвенные бактерии располагаются короткими цепочками или попарно, концы, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. При окраске на капсулы мазков из свежего материала сибиреязвенные палочки окружены капсулой, из несвежего —бактерии несколько увеличены, иногда отмечают «тени», а вместо капсул — слабоокрашенные обрывки. При обработке препаратов люминесцирующими сыворотками в мазке обнаруживают специфическое свечение, свидетельствующее о наличии в исследуемой пробе возбудителя сибирской язвы.

Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18…24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.

После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.

На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.

Для биопробы используют лабораторных животных, восприимчивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских свинок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2…0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5…1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Зараженные животные гибнут через 1…3 сут, иногда позже. Трупы вскрывают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови сердца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.

Сроки исследований: микроскопического — в день поступления материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.

Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологический материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18…20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.

При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1…2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и кипятят 30…40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1…2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16…18 ч при температуре 20 ± 2 °С.

Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ‘ прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.

РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2…0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2…0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.

Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1…2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.

РП считают положительной, если через 1…2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо.

При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить мазки из вакцинного штамма и промикроскопировать их.

2. Разработать схему дифференциальной диагностики сибирской язвы от коликов, тимпании, отравления.

Метки: