Цель занятия; изучить методы диагностики листериоза, систему профилактических и оздоровительных мероприятий.
Материалы и оборудование: таблицы, диапозитивы, биопрепараты (диагности-кумы, вакцины).
Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Листериоз — инфекционная болезнь животных и человека, возбудитель которой Listeria monocytogenes—подвижная полиморфная грамположительная мелкая палочка. Листерии широко распространены во внешней среде, сравнительно высокоустойчивы:
При низких температурах (4…6°С) длительное время (до нескольких лет) сохраняются в почве, воде, соломе, зерне. Размножаются в почве, воде, молоке, мясе, силосе, а также в трупах.
Методы диагностики. Диагноз на листериоз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, а также результатов лабораторных исследований.
Согласно эпизоотологическим данным листериоз поражает домашних и сельскохозяйственных животных—свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже — кошек и собак, а также домашнюю и декоративную птицу — гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек. Более восприимчив молодняк и беременные животные. Источник возбудителя инфекции—больные, листерионосители (5…90 %); основной резервуар —дикие и синантропные грызуны. Возбудитель передается фекально-оральным, контактным, аэрогенным, трансплацентарным путем и через поврежденную кожу; выделяется из организма с истечениями из носа, половых органов, с абортированными плодами, молоком, калом и мочой.
Клинические признаки зависят от формы и течения болезни. Наиболее характерные симптомы: угнетение, снижение аппетита, нарушение координации движений, судороги, парез нижней челюсти, конъюнктивит, потеря зрения (кератит), расстройство желудочно-кишечного тракта, повышение температуры тела, аборты, задержание последа, маститы.
Патологоанатомические изменения также зависят от формы и течения болезни. При нервной форме отмечают отек мозга, кровоизлияния в мозговой ткани и отдельных внутренних органах. При септической форме находят изменения, свойственные септическому процессу, — кровоизлияния в паренхиматозных органах, увеличение селезенки и дегенеративные изменения во всех органах, а также отек или гиперемию легких; при генитальной — поражения матки (десквамация эпителия, эрозии, кровоизлияния).
Лабораторная диагностика состоит из бактериологического, серологического и гистологического исследований. Для посмертной диагностики в ветеринарную лабораторию направляют трупы мелких животных или голову (головной мозг), паренхиматозные органы (часть печени, селезенку, почку, пораженные участки легких), абортированный плод и его оболочку. Материал посылают свежим или консервируют 30%-м водным раствором глицерина. Для гистологического исследования используют кусочки головного (все отделы) и спинного мозга, а также паренхиматозных органов, зафиксированные в 10%-м растворе нейтрального формалина.
Для прижизненной диагностики на бактериологическое исследование отправляют истечения из половых органов самок, у которых отмечены аборты; при маститах — молоко из пораженных долей вымени; на серологическое—кровь или сыворотку крови от больных или подозрительных по заболеванию животных (желательно парные сыворотки, взятые с интервалом 7…14 дней).
Бактериологический метод диагностики при листериозе — решающий. Мазки из исходного материала окрашивают по Граму, а также методами флюоресцирующих антител (прямой и непрямой). Для выделения чистой культуры используют обычный или печеночный агар и бульон с добавлением 1 % глюкозы и 2…3 % глицерина, а также кровяной агар и элективные среды (с теллуритом калия, с теллуритом калия и флоримицином или полимиксином). Черный цвет колоний обусловлен восстановлением теллурита калия до металлического теллура. Характерные признаки возбудителя листериоза — помутнение бульона и появление мелких росинчатых колоний на агаре, формирование зоны р-гемолиза на кровяном агаре. Колонии листерий в проходящем свете — голубого цвета с зеленоватым оттенком и мелкозернистые по структуре. Идентификация состоит из нескольких направлений. Определяют подвижность, исследуя 6…12-часовую культуру, ферментативные свойства (пестрый ряд). Листерий идентифицируют серологически — в РА на стекле с поливалентной листериозной агглютинирующей сывороткой, а также конъюнктивальной пробой на морских свинках или внутрикожной пробой на морских свинках или кроликах. На конъюнктиву морской свинке наносят 2 капли исследуемой бульонной культуры и легко массируют веки ватным тампоном. При положительном результате на 2…4-й день развивается гнойный конъюнктивит. При внутрикожной (дермонекротической) пробе в тщательно выстриженный участок на боку морской свинке или кролику вводят 0,3…0,5 мл бульонной культуры. Через 24…48 ч возникает воспаление с последующим некрозом и образованием струпа.
Для биопробы используют 2…3 белых мышей. Суспензию головного мозга, внутренних органов или чистой культуры вводят животным подкожно или внутрибрюшинно в дозе 0,3…0,5 мл. Чтобы повысить эффективность биопробы, мышам за З…4ч до заражения инъецируют внутримышечно кортизон в дозе 5 мг. При положительной биопробе животные погибают через 2…6сут. На вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках (иногда они отсутствуют). Срок наблюдения за животными 14 сут.
С помощью гистологического исследования тканей головного и спинного мозга при поражении бактериальными формами листерий обнаруживают хорошо выраженные пролиферативные изменения, отек, дегенерацию нейронов, нейронофагию, а при поражении Z.-формами — энцефалопатию, сопровождающуюся дистрофическими изменениями без пролиферации клеток.
Для серологической диагностики применяют PA, PCK, РНГА и РИФ, с помощью которых устанавливают диагноз, выявляют листерионосительство и хронически больных животных. Кроме того, при исследовании парных сывороток (ретроспективная диагностика) нарастание титра антител в 2…4 раза подтверждает диагноз на листериоз.
Используют также прямой (ПМФА) и непрямой (НМФА) методы флюоресцирующих антител, с помощью которых можно идентифицировать возбудителя в культурах, обнаружить листерии в органах и тканях, а также определить их серогрупповую принадлежность. При люминесцентной микроскопии для листерии характерно ярко выраженное золотисто-зеленоватое свечение, четко заметны морфологические особенности бактерий и темная центральная зона клетки.
Профилактические и оздоровительные мероприятия. В целях профилактики комплектуют фермы животными только из благополучных по листериозу хозяйств. Строго учитывают все случаи абортов, мертворождения и падежа и направляют патологический материал для лабораторного анализа. При маститах исследуют молоко бактериологическим методом.
При выявлении больных листериозом животных в хозяйстве проводят тщательное эпизоотологическое обследование.
При установлении диагноза на листериоз хозяйство объявляют неблагополучным и вводят ограничения.
Осматривают все поголовье и выбраковывают клинически больных животных. Чтобы выявить животных листерионосителей и бессимптомно больных, исследуют сыворотки крови. Положительно реагирующих изолируют, лечат антибиотиками и затем направляют на убой. Остальных вакцинируют сухой живой вакциной из штамма АУФ согласно наставлению по ее применению.
Туши и продукты убоя больных и подозрительных по заболеванию животных запрещается выпускать в сыром виде. Если обнаружены дегенеративные и другие патологические изменения в мышцах (абсцессы и т. д.),тушу и внутренние органы направляют на утилизацию; при отсутствии патологических изменений — исследуют на сальмонеллез бактериологическим методом. В случае обнаружения сальмонелл внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожают, а туши проваривают и используют для изготовления консервов. При отсутствии сальмонелл туши, шпик и внутренние органы перерабатывают на вареные, варено-копченые колбасы и консервы или проваривают. При листериозе мясо, кроме того, разрешается использовать на изготовление вареных колбас, варено-копченых грудинок и кореек.
Патологически измененные органы, кишки и кровь, а также головы от животных, больных листериозом, во всех случаях направляют на утилизацию с обработкой при температуре не менее 100 "С или проваривают при той же температуре в течение 1ч.
Молоко, полученное от животных, давших положительный результат в серологической реакции, кипятят в течение 15 мин или перерабатывают на топленое масло.
Для искусственного осеменения используют сперму здоровых производителей.
Непременное условие эффективности оздоровительных мероприятий — регулярная дезинфекция, дезинсекция и дератизация. Навоз обеззараживают биометрическим способом. Для дезинфекции используют осветленный раствор хлорной извести с содержанием 2 % активного хлора, 3%-й горячий раствор гидроксида натрия, 5%-й раствор хлорида йода или ксилонафт.
Пробы силоса, хранящегося в траншеях или буртах, направляют на бактериологическое исследование. В случаях контаминации силосной массы листериями весь силос обеззараживают биотермическим способом.
Хозяйство (ферму, отделение, двор) объявляют благополучным по листериозу через 2 мес со дня последнего случая выявления клинически больных животных и после заключительной дезинфекции помещений и территории фермы.
Допускается вывозить овец для племенных и пользовательных целей в течение 2 лет после оздоровления хозяйств только при условии отрицательного результата серологического исследования. Вывоз животных других видов разрешается при тех же условиях в течение 1 года. Кроме того, разрешается без ограничений сдавать животных на мясокомбинат.
В хозяйствах, ранее неблагополучных по листериозу, животных исследуют серологическим методом 1 раз в год перед постановкой на стойловое содержание до тех пор, пока не будут получены отрицательные результаты у 100 % поголовья. Положительно реагирующих животных изолируют, лечат и направляют на убой. При вывозе животных в ветеринарном свидетельстве указывают результат их исследования на листериоз.
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Решить эпизоотологическую задачу.
На мелочно-товарной ферме начали использовать в корм силос, после чего среди коров и телят возникло заболевание со следующими клиническими признаками: повышение температуры тела до 40,5 °С (у некоторых животных — в пределах нормы), угнетение, отказ от корма, потеря зрения (кератит), конъюнктивит, стоматит, приступы буйства, кроме того, у телят — понос. У одной стельной коровы отмечен аборт.
Установить диагноз и разработать схему дифференциальной диагностики листериоза.