Лабораторная работа. Диагностика туберкулеза

Цель занятия: изучить методы диагностики туберкулеза.

Материалы и оборудование: безыгольные инъекторы, туберкулины, наборы для туберкулинизации, животные сельскохозяйственные или лабораторные (морские свинки).

Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии, виварий или

Хозяйство, неблагополучное по туберкулезу.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Туберкулез—инфекционная болезнь, вызываемая микобактериями некоторых видов. Восприимчивы сельскохозяйственные, домашние и дикие животные всех видов, в том числе птицы, а также человек. Ввиду того что у животных, как правило, встречается хроническое течение болезни, самое важное в системе мероприятий — своевременно выявить зараженных животных и удалить их из стада как возможных источников возбудителя инфекции.

Первичный диагноз на туберкулез в ранее благополучных хозяйствах устанавливают комплексным методом — на основании эпизоотологического, клинического, аллергического, патологоанатомического и лабораторного исследований.

При эпизоотологическом методе диагностики особое внимание обращают на условия комплектования стада: когда, где были приобретены животные, с какими документами поступили, когда исследованы на туберкулез. Тщательно анализируют качество кормов, особенно обезжиренного молока, поступающего с молокозаводов, и кормовых отходов мясокомбинатов, оценивают состояние водоемов, предназначенных для водопоя, и смежных

Пастбищ.

Уточняют эпизоотическую ситуацию по туберкулезу в индивидуальном секторе и соседних хозяйствах, а также эпидемиологическую обстановку, особенно среди животноводов. Выясняют, нет ли вблизи туберкулезных санаториев или диспансеров.

При клиническом методе осматривают всех животных, обращая внимание на органы дыхания, пищеварения, лимфатические узлы, доступные для исследования. Выраженные клинические признаки туберкулеза могут проявляться в различные сроки: от 30 дней до 1 года и более, что зависит от вирулентности возбудителя болезни и резистентности организма животного.

При затруднении в постановке прижизненного диагноза прибегают к контрольно-диагностическому убою животных, подозрительных по заболеванию, и питологостатомическим исследованиям. Тщательно осматривают миндалины, подчелюстные, заглоточные и околоушные лимфатические узлы. Осмотр ливера начинают с легочных лимфоузлов: левого и правого бронхиальных, средостенных (краниальных, средних, задних), затем обследуют ткань легких, делая разрезы толщиной 10…15 мм. Печень, почки, селезенку, молочную железу обследуют по обычным правилам ветсанэкспертизы. Особое внимание обращают на брыжеечные лимфоузлы. Отмечают также состояние плевры, реберных, а также наружного и глубокого пахового лимфатических узлов. У взрослых животных в 24,3 % случаев туберкулезный процесс локализуется в легких, бронхиальных, средостенных, заглоточных лимфатических узлах, а у молодняка — чаще в брыжеечных и заглоточных лимфоузлах. При поражении серозных покровов находят на плевре и брюшине множественные плотные блестящие туберкулезные узелки («жемчужница»), достигающие размеров лесного ореха.

Для лабораторного исследования отправляют взятые при вскрытии кусочки пораженного органа вместе с очагом поражения. Если видимых поражений не обнаружено, пробы размером (10…15) х (5…10) х (3…9) мм берут из заглоточных, средостенных, бронхиальных, брыжеечных лимфатических узлов и ткани легкого.

Для прижизненной диагностики отправляют пробы трахеальной слизи и молока, а иногда мочи и кала.

Пробы, взятые для гистологического исследования, помещают в 10%-й раствор формалина (10мл 40%-го формалина +90 мл воды), соотношение проба—консервант 1:10; для бактериологических исследований — в 30%-й водный раствор глицерина.

Поступивший в лабораторию материал исследуют бактериоскопическим (световая и люминесцентная микроскопия), бактериологическим (выращивание на искусственных питательных средах), биологическим (биопроба на морских свинках, кроликах и курах) и гистологическим методами.

Методом биопробы обнаруживают в исследуемом биоматериале возбудителя болезни и определяют его видовую принадлежность. Биопробу с исследуемым материалом ставят следующим образом. Сначала двух морских свинок массой 300…500 г (желательно светлой масти) исследуют на туберкулез: им вводят внутрикожно 25 ТЕ туберкулина для млекопитающих в 0,1 мл растворителя или стерильного физиологического раствора. Реакцию учитывают через 24 ч. Положительная реакция проявляется гиперемией кожи в месте введения аллергена и образованием уплотненной припухлости диаметром 5 мм и более, иногда с некрозом в центре.

При отрицательной реакции 1 мл суспензии исследуемого материала вводят морским свинкам подкожно в область паха. За животными наблюдают в течение 3 мес. Через 30 сут свинок вновь исследуют на туберкулез, как указано ранее. При развитии клинических признаков заболевания или положительной реакции на аллерген одно из животных после убоя исследуют патологоанатомическим методом. Если обнаруживают характерные туберкулезные изменения, из пораженных участков органов и лимфатических узлов готовят мазки и окрашивают по Цилю—Нильсену. При положительном результате бактериоскопии дают положительное заключение на туберкулез и биологическое исследование прекращают. При отсутствии характерных патологических изменений в органах и лимфатических узлах животного и отрицательной бактериоскопии мазков из материала продолжают наблюдать за второй свинкой. Ее убивают через 3 мес после заражения и на основании результатов вскрытия и бактериоскопии мазков дают заключение.

Чтобы определить вид микобактерий, выделенных из исходного материала, заражают двух морских свинок подкожно, двух кроликов в краевую вену уха, а при исследовании культур, выделенных от свиней, — двух кур в подкрыльцовую вену по 1 мг микобактерий, суспендированных в 1 мл физиологического раствора. За подопытными животными наблюдают 3 мес. Вид микобактерий туберкулеза определяют, как указано в таблице 5.

Для массовых прижизненных исследований на туберкулез используют аллергическую диагностическую пробу, которую на протяжении многих лет считали основным и надежным методом диагностики болезни. Однако в последние 10…15 лет наблюдают, с одной стороны, массовые неспецифические реакции на туберкулин, с другой — снижение аллергической реактивности у животных, зараженных туберкулезом.

На практике используют два метода туберкулинизации: внутрикожный — для диагностики туберкулеза у животных всех видов (кроме лошадей и птиц) и глазной (офтальмопробу) —для диагностики туберкулеза у лошадей. Птицам туберкулин инъецируют в бородку. В некоторых случаях крупный рогатый скот исследуют одновременно с помощью глазной и внутрикожной проб.

Для дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций ставят симультанную пробу с двумя аллергенами — ППД для млекопитающих и аллергеном КАМ, изготовленным из нескольких штаммов атипичных микобактерий.

5. Основные свойства микобактерий туберкулеза.

Ученые не прекращают интенсивный поиск эффективных и нетрудоемких методов диагностики туберкулеза: испытывают туберкулезные антигены для серологических исследований и более современные методы — иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразно-цепную реакцию (ПЦР), метод дактилоскопии и др.

Согласно методическим указаниям диагноз на туберкулез считают установленным, если выделена культура возбудителя из патматериала или получены положительные результаты биопробы. У крупного рогатого скота, буйволов и верблюдов диагноз также считают установленным при обнаружении в органах и тканях изменений, типичных для туберкулеза. В пунктах, неблагополучных по туберкулезу, всех животных, положительно реагирующих на туберкулин, считают больными туберкулезом.

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

В период производственной практики освоить методы туберкулинизации животных разных видов и составление отчетной документации.

Метки: