Маллеин применяют для аллергической диагностики сапа у однокопытных животных для глазной или подкожной пробы.
Три—четыре капли маллеина вводят на конъюнктиву глаза лошади с помощью пипетки или шприца, в котором игла заменена резиновой трубочкой.
Лошади с двухсторонними конъюнктивитами или другими заболеваниями глаз не должны подвергаться глазной пробе. Глазная реакция обычно начинается через 2—6 часов и длится до 12—24 часов; иногда она может держаться 36—48 часов и больше. Чем чаще ведут наблюдение за ходом реакции, тем лучше. Поэтому пробу нужно производить утром и наблюдать её на 3—6—9-м часу и на следующее утро.
Положительная реакция характеризуется гнойным конъюнктивитом различной силы: конъюнктива краснеет, набухает, снаружи может быть слезотечение различной силы, припухание век и закрытие глаз. В глазной щели, обычно по краю нижнего века, появляется шнурок гноя, опускающийся у внутреннего угла глаз. При слабо выраженной реакции гной имеется только у внутреннего угла глаза.
Сомнительная реакция характеризуется незначительным покраснением и припухлостью конъюнктивы и слезотечением. Лошади, сомнительно реагирующие на маллеин, подвергаются на другой день повторной маллеинизации в другой или тот же глаз. При наличии вторичного сомнительного результата лошадь считается положительна реагирующей на маллеин.
Отрицательной реакция считается в том случае, если глаз остаётся нормальным.
Все сомнительные случаи обязательно проверяются через 5—7 дней повторным введением маллеина в тот же глаз. Обычно повторная реакция наступает уже через 2—5 часов и бывает резче выражена.
Для более тщательного выделения маллеинщиков, всех лошадей, давших положительную или сомнительную реакцию, на 4—5-й день обязательно маллеинизируют повторно в тот же глаз, в который маллеин вводили первоначально.