Методика постановки реакции преципитации на сибирскую язву

Реакцию преципитации применяют для диагностики сибирской язвы как при исследовании кожевенного сырья в лабораториях Асколи, так и в диагностических бактериологических лабораториях, как подсобную реакцию при бактериологических исследованиях на сибирскую язву.

Исследование кожевенного сырья на сибирскую язву при помощи реакции преципитации ведут холодным способом после предварительной стерилизации взятых проб. Доставленные в лабораторию пробы стерилизуют в автоклаве при 11/2 атмосферах в течение получаса или при 1 атмосфере в течение одного часа. После стерилизаций пробы охлаждают и затем измельчают. Измельчённые пробы должны быть весом не менее 1 г. Нумерация банок должна соответствовать номерам проб.

Экстрагирование проб производят холодным способом в материальных банках ёмкостью до 50 г.

Пробы от свиных шкур экстрагируют горячим способом в пробирках на водяной бане при кипячении в течение 30 минут.

Экстрагирующая жидкость разливается в отношении 1 : 10. В качестве экстрагирующей жидкости берут физиологический раствор (0,85% очищенной поваренной соли), к которому добавляют 0,3 о/о кристаллической карболовой кислоты для предотвращения роста бактерий и получения легко фильтруемых, прозрачных экстрактов. Лучшая температура для экстрагирования 8—14° С. Добавление карболовой кислоты особенно необходимо при температуре помещения от 14 до 20°С. Продолжительность экстрагирования—от 16 до 20 часов.

Экстракты фильтруют через воронки в укороченные бактериологические пробирки. В качестве фильтра употребляют асбестовую вату (нейтральную). Экстракты после фильтрации должны быть прозрачны. Если полученный фильтрат мутный, то допускается вторичная фильтрация экстрактов. При этом первую порцию второго фильтрата, который может содержать малое количество преципигиногена, выбрасывают.

Порядок применения сыворотки. Перед употреблением сыворотка должна быть проконтролирована посредством стандартного антигена и экстракта из заведомо сибиреязвенного материала (желателен материал такого же рода, как подвергаемый исследованию). Сыворотка должна давать ясно положительную реакцию через 30 секунд (до 1 минуты) со стандартным антигеном и до 5 минут—с экстрактом из заведомо сибиреязвенной кожи.

Лаборатории, применяющие преципитирующую сибиреязвенную сыворотку, должны иметь в своём распоряжении не менее 2—3 различных серий для взаимного контроля. Кожи, давшие положительную или сомнительную реакции на сибирскую язву, должны быть повторно экстрагированы и проверены повторно с двумя—тремя различными сериями сывороток. Сыворотка, употребляемая для реакции, должна быть прозрачной. Из фладсонов, с хорошо отстоявшейся сывороткой, возможно применение её без предварительного филь-трования при условии осторожного насасывания, без взбалтывания осадка на дне флакона. Сыворотки, имеющие муть даже после фильтрования через асбест, не должны применяться. Нельзя также применять сыворотки непосредственно после транспортировки или взбал-тывания их. В таких случаях сыворотке нужно дать отстояться не менее 10—15 дней, так как фильтрование не даёт той прозрачности, какая достигается путём отстоя. Сыворотка должна транспортироваться в тёплое время года (с 1 апреля по 1 ноября). В зимнее время сыворотку следует пережить в условиях, исключающих замораживание (в тёплом вагоне), так как тёплая упаковка {вата, войлок) не гарантируют от замораживания.

Соединение компонентов. Компоненты при реакции преципитации соединяют наслаиванием профильтрованных прозрачных экстрактов на разлитую и проконтролированную преципитирующую сыворотку. Сыворотку и экстракт для реакции берут по 0,25—0,3 см3. Можно наслаивать экстракт на разлитую сыворотку или подслаивать сыворотку под экстракт пастеровской пипеткой. Реакцию учитывают в зависимости от активности преципитирующей сыворотки в течение 10—15 минут. Реакцию с экстрактами из мокросолёного и сухосолёного сырья учитывают в течение 20 минут.

Диагностическую оценку реакции производят при проходящем свете на чёрном фоне. В тех пробирках, где граница между, сывороткой и экстрактами нерезко выражена, реакцию не учитывают и ставят вновь с тем же экстрактом.

Если материал был сибиреязвенным, то на месте соприкосновения экстракта с сывороткой через 1—15 минут появляется различной резкости серовато-белый диск (кольцо).

При сомнительных реакциях исследование повторяют. В тех случаях, когда вторично получается сомнительная реакция, исследуемая кожа считается сибиреязвенной.

Вся посуда для реакции преципитации должна быть чистой, прозрачной. Посуду промывают в тёплой солёной (1—2 о/о поваренной соли) воде при помощи волосяных ершей и щёток с последующим промыванием в чистой воде. Улелгутовские пробирки промывают в дестиллированной воде. После мытья посуду просушивают.

Ежедневно перед началом работы ставят следующие контроли:

а) преципитирующие сыворотки и стандартный антиген или экстракт из заведомо сибиреязвенной кожи (реакция положительная);

б) преципитирующие сыворотки и экстракт из заведомо здоровой кожи (реакция отрицательная);

в) нормальная сыворотка и экстракт из заведомо сибиреязвенной кожи или стандартный антиген (реакция отрицательная);

г) преципитирующая сыворотка и экстрагирующая жидкость (реакция отрицательная).

При исследовании методами преципитации лаборатория должна сообщить о положительных реакциях старшему районному (городскому) ветеринарному врачу, в район, откуда материал поступил на исследование.

Метки: