Выделение и идентификация возбудителя актиномикоза

Материалом для исследования служили больные актиномикозом животные, принадлежащие СПК «Украина» Красногвардейского района АР Крым. Экстирпированные актиномикомы были взяты для бактериологического исследования, подвергнуты микроскопии, окраске по Граму и простым методом с последующим высевом на питательные среды. Первичный посев производился из гноя, взятого из актиномиком на МПА, МППБ агар Сабуро. Колонии актиномицетов исследовались макроскопически и микроскопически. Морфологические особенности выращенных нами культур актиномицетов были следующие: в мазках, приготовленных из культур, выращенных на МПА, МППБ и агаре Сабуро, обнаруживался хорошо выраженный одноклеточный несептированный мицелий, состоящий из ветвящихся тонких нитей различной длины ив поперечном сечении не превышающий 0,6–0,7 микрона. Мицелий хорошо окрашивался по Граму.

При росте на МППБ выделенные актиномицеты, образовывали колонии плотной консистенции, которые срастались со средой гифами мицелия и как бы врастали в ага, что создавало помехи при работе с бактериальной петлёй. В первый день они имели серовато-белый или палевый цвет, за исключением культуры, выделенной от одного из животных, имевшей желтоваточкоричневую окраску.

Колонии культур, выросшие без признаков пигментации через 2–3 дня покрылись воздушным беловато-серым мицелием. Колонии, имевшие желтовато-коричневый оттенок, тоже покрылись налетом, но лишь по краям ростковой питательной среды.

Выделенные нами колонии актиномицетов по культуральным свойствам были подразделены на три группы. Первая группа – актиномицеты, которые образовывали на агаре мелкие и средней величины колонии – овальные, бугристые и плотно сраставшиеся с питательной средой. На второй и третий день роста они становились выпуклыми и приобретали желтовато-коричневый цвет. В процессе дальнейшего роста на них появлялись дочерние колонии, которые покрывались белым налетом, напоминавшим собой пушок или гипс.

При культивировании актиномицетов на МППБ, первая группа образовывала на дне пробирки незначительный хлопьевидный осадок, разбивавшийся при встряхивании на отдельные пушинки, оставляя бульон прозрачным и без образования пленки.

Актиномицеты второй группы на поверхности МПА росли в форме крупных, округлой формы колоний, вросших в толщу питательной среды. На второй и третий день роста они становились выпуклыми, бугристыми, кратерообразными и покрывались белоснежным налетом. Прикультивировании на МППБ, эта группа «лучистых грибков» образовывал на дне пробирки рыхлый хлопьевидный осадок, трудно разбивавшийся при встряхивании. Некоторые культуры актиномицетов образовывали в пробирке пристеночное кольцо но бульон при этомоставался прозрачным.

Культуры актиномицетов третьей группы на агаре Сабуро образовывали округлой формы колонии, с пологими краями и кратерообразными углублениями в центре, которые на второй и третий день культивирования покрывались белым налётом, плотно срастались с питательной средой и с трудом отделялись от нее. На пятый — шестой день культивирования на поверхности колоний появлялись капельки прозрачной жидкости, а на МППБ дне пробирки — хлопьевидный осадок, состоящий из сросшихся между собою пушинок.

Биохимические свойства изучались путём посева выделенных культур актиномицетов на среды с углеводами, а также на простое и лакмусовое молоко, желатин и пептонную воду. Данные исследования проводились на базе Крымской опытной станции Национального научного центра «Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины». Полученные результаты исследований приводятся в таблице.

Таблица 3.7

Биохимические свойства выделенной культуры Actinomyces Bovis

Группа Простое молоко Лакмусовое молоко Лактоза Сахароза Глюкоза Маннит Желатин Образование H2S Индол
1 Пептонизация Пептонизация
2 Пептонизация Пептонизация
3 Пептонизация Пептонизация

Опыты по изучению биохимических свойств выделенных нами культур актиномицетов показали, что биохимические свойства у них выражены слабо.

Подавляющее число культур не ферментировали лактозу, глюкозу, сахарозу и маннит. Молоко простое и лакмусовое пептонизировалось, но лакмусовое молоко не изменяло цвет. Некоторые культуры разжижали желатин и выделяли сероводород, а часть культур сероводород не выделяли и не разжижали желатин.

На основании проведенных нами исследований мы считаем возможным отнести культуры актиномицетов 1-й, 2-й и 3-й групп к семейству Actiomyceae, к роду Actinomyces, вид Actinomyces bovis [ ].

Кльтуры 1-й группы, вследствие изменчивости их в организме больных животных, отличались2-й и 3-й групп некоторыми особенностями.

Все культуры актиномицетов, выделенные нами от больных актиномикозом животных, обладали слабо выраженными биохимическими свойствами, но некоторые из них выделяли протеолитический фермент и сероводород.

Помимо основного возбудителя, Actinomyces bovis, удалось выделить несколько штаммов Actinomyces Israeli. Колонии имели коротко-гифный мицелий, распадающийся на палочковидные, корковидные и нитевидные элементы разной длины. При этом в культуре встречались деформированные клетки — раздутые, шаровидные, угловатые, веретеновидные, колбовидные. Колонии были пастообразные, без воздушного мицелия, или покрытие едва заметным беловатым налётом воздушных веток, бурого вещества и пигментов не образовывали. Рост на синтетических средах был слабым. На МППБ с глицерином культура грибка росла хорошо, среда оставалась прозрачной, не бурела, осадок — зернистый.

При определении биохимических свойств установили, что выделенная культура грибка желатин не разжижает, молоко не коагулирует и не пептонизирует, слабо гидролизует крахмал, нитратов не восстанавливает. Ассимилирует глюкозу, сахарозу, манит, лактозу, не образует индол и сероводород.

Actinobacillus Lignieresii. Материалом для исследования служил гной из абсцессов на шее и пораженных лимфоузлов. Посевы материала проводили на те же питательные среды, которые использовали при культивировании Actinomyces bovis. Засеянные среды инкубировали аэробно при tо= 37°С, рост грибка иногда обнаруживали уже через 24 — часа.

На плотных питательных средах грибок образовывал круглые, гладкие, блестящие, опалесцирующие, бесцветные колонии, состоящие из коротких, неподвижных грамотрицательных палочек и кокков. Мицелий был развит слабо, быстро распадался на мелкие палочковидные и шаровидные элементы. Колонии были голые, бесцветные, бурое вещество не образовывалось, воздушного мицелия не было. В жидких питательных средах клетки микроорганизма были мелкие, палочковидной формы, длиной 1-3 мк, кислотоустойчивые. Культуры — не пигментированные, лучше росли на белковых питательных средах.

При определении биохимических свойств Actinobacillus lignieresii было установлено, что выделенная культура желатин не разжижает, молоко не коагулируют и не пептонизирует, крахмал не гидролизует и не ассимилирует, ферментирует с образованием кислоты глюкозу, лактозу, сахарозу, ксилозу, левулезу.

Nocardia aSteroides. Материалом для исследования служил гной из абсцессов. Материал засевали на агар Сабуро, МПА и МППБ и в аэробных условиях инкубировали при tо= 37оС в течение 20 суток, посевы просматривали через каждое 3-5 дней.

На плотных средах грибок образовывал гладкие или бугристые колонии, воздушный мицелий был слабо развит. Спороносцы не спиральные, моноподиальные, одиночные, споры овальные, шаровидные [ ]. В зависимости от штамма культуры были красными, красно-розовыми, красно-оранжевыми, пигмент в питательную среду не проникал, бурого вещества не образовывал, воздушный мицелий был розовым или белым, распадался на палочки и кокки.

При изучении биохимических свойств было установлено что грибок желатин не разжижает, молоко не коагулирует и не пептонизирует, крахмал не гидролизует, нитраты не редуцирует; ассимилирует слабо и непостоянно глюкозу, галактозу, сахарозу; не усваивает лактозу, маннит; не образует сероводород и индол.

Основные биохимические свойства выделенных культур представлены в таблице 3.8.

Таблица 3.8

Биохимические свойства выделенных культур

Простое молоко Лакмусовое молоко Лактоза Сахароза Глюкоза Маннит Желатин Образование H2S Индол
Actinomyces israeli + + +
Actinobacillus lignieresii
Nocardia asteroides + +

 

 

Метки: