ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ

Уменьшение количества эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови называется Анемией. Она бывает абсолютной и относительной. Абсолютная полицитемия развивается вследствие раздражения красного костного мозга, при заболеваниях легких (эмфизема), сердца (пороки сердца). Относительная полицитемия развивается в условиях обезвоживания организма (при усиленном потоотделении, поносах, рвоте) В зависимости от причины происхождения различают несколько видов анемий: постгеморрагическая, гемолитическая, алиментарная, инфекционная, злокачественная.

Качественные изменения эритроцитов:

Гипохромазия — появление эритроцитов со слабой окраской, обусловленной малым содержанием гемоглобина. Такие эритроциты появляются после кровопотерь.

Гиперхромазия — появление эритроцитов с более интенсивной окраской чем в норме. Обусловлено это явление большим чем в норме содержанием гемоглобина в эритроцитах. Наблюдается при токсической и злокачественной анемии.

Полихромазия — способность эритроцитов окрашиваться и кислыми и основными красками. Это явление связано с наличием в протоплазме эритроцитов участков разной степени зрелости.

Пойкилоцитоз — наличие эритроцитов разной формы (в виде гири, запятой, грушевидные, овальные). Возникают эти формы в самой крови из менее стойких эритроцитов.

Анизоцитоз — появление эритроцитов разных размеров (микро-и макроцитов). Пойкилоцитоз и аишоцитоз свидетельствуют о функциональной недостаточности работы костного мозга.

Включения в эритроцитах могут быть как остатки ядерной субстанции — (Тельца Жолли) или ядерной оболочки (Кольца Кабо).

К включениям относятся и базофильная пунктация — мелкая зернистость синего цвета. Наблюдается при отравлении солями тяжелых металлов (солями свинца).

Патология красной крови

Цель занятия. Изучить нарушения, возникающие в животном организме при изменении количества крови, количественного и качественного состава ее форменных элементов

Задание 1. Изучить последствия изменений общей массы крови у животных. Влияние гиперволемии на кровообращение в сосудах языка лягушки.

Оснащение: Препаровальные дощечки, Булавки, кюветы, микроскопы; шприцы на 5 мл с иглой, глазные пипетки; раствор Рингера (100 мл), 10%-ный раствор этилового спирта (300 мл); лягушки.

Постановка опыта. Лягушку наркотизируют алкоголем, помещают на препаровальную дощечку брюшком вверх. Булавками фиксируют верхнюю челюсть у края круглого отверстия и все четыре лапки. Иссекают кожу и грудную кость над областью сердца для лучшего доступа к сердечной мышце. Из ротовой полости осторожно извлекают язык, расправляют его над отверстием. Препарат кладут на предметный столик стереоскопического или обычного микроскопа. Изучают микроскопическую картину кровоснабжения ткани языка. В полость желудочка вводят 5-6 мл раствора Рингера и наблюдают за характером кровотока. Обращают внимание на скорость движения крови, число функционирующих сосудов, количество форменных элементов в осевом слое тока крови. Сопоставляют с исходным кровотоком.

Оформление протокола опыта. Записывают ход эксперимента. Отмечают изменения кровотока, возникшие после существенного увеличения объема циркулирующей крови.

В опытах на животных изучить изменения количественного и качественного состава эритроцитов

Моделирование и изучение гемолитической анемии у животных.

Оснащение: клетки для кроликов; кюветы; шприцы на 5 мл с иглой; смесители для красной крови; микроскопы; камеры Горяева; электрофотоколориметр; стандартный набор для определения гемоглобина гемоглобинцианидным методом; гемометры Сали; аппараты Панченкова для определения СОЭ; вата (50 г); фильтровальная бумага (30 г); 5%-ный раствор фенилгидразина (20 мл); 70%-ный раствор этилового спирта (20 мл); 1%-ный раствор натрия хлорида (70 мл); 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты (5 мл); 5%-ный раствор лимоннокислого натрия (5 мл); подопытные животные: кролики или животные с анемией (поросята).

Постановка опыта. На кролика массой тела более 2 кг действуют гемолитическим ядом — фенилгидразином, вызывающим тяжелую форму анемии. За четыре дня до занятий кролику в краевую вену уха в течение трех дней подряд вводят 1%-ный раствор фенилгидразина из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. В день занятий измеряют ряд показателей красной крови у подопытного и контрольного кроликов. Можно использовать анемичных поросят.

Пробы периферической крови берут из сосудов уха, для чего выстригают шерсть, кожу протирают спиртом, после высыхания прокалывают краевую вену уха иглой, вытекающую кровь используют для анализов.

подпись: рис.17. камера горяева (а) 
и смеситель (б)
Определение числа эритроцитов. В абсолютно чистый и высушенный смеситель для красной крови набирают кровь до метки 0,5. Манипуляцию взятия проводят быстро. При этом следят, чтобы не попали пузырьки воздуха. После взятия крови кончик капилляра быстро вытирают ваткой или фильтровальной бумагой, погружают в сосуд с 1%-ным раствором натрия хлорида и набирают до метки 101. Смеситель закрывают с обоих концов большим и средним пальцами рук и осторожно встряхивают содержимое в течение 1-2 мин для получения равномерной взвеси эритроцитов. Получают разведение крови в 200 раз. Подсчет форменных элементов красной крови осуществляют в камере Горяева (рис.17), которую предварительно покрывают шлифованным стеклом, притертым до появления радужных кругов (ньютоновых колец). Из меланжера (смесителя) удаляют на ватку три первые капли содержимого, а затем одну капельку взвеси эритроцитов подводят под среднюю пластинку камеры, куда жидкость поступает в силу капиллярности. Между покровным стеклом и пластинкой не должно быть пузырьков воздуха.

Поверхность сетки раз-делена на большие и малые квадраты. Часть больших разделена на 16 малых квадратов, площадь каждого составляет 1/400 мм2, высота всех камер равна 1/10 мм. Таким образом, объем малого квадрата 1/4000 мм. Подсчет клеток проводят под малым увеличением микроскопа в пяти больших квадратах, начиная с левого квадрата по диагонали. Считают эритроциты расположенные в каждом маленьком квадрате, и те, которые касаются левой и верхней стенок. Эритроциты, касающиеся правой и нижней стенок, не учитывают.

Для определения числа эритроцитов в 1 мкл крови (X) Используют формулу

Х=

А×4000×b

В

Где А — Число эритроцитов в пяти больших квадратах; B – степень разведения крови (1 : 200); В – Количество маленьких квадратов в пяти больших (80); 4000 — 1/4000 объема счетной камеры над маленьким квадратом, мкл.

Для определения числа эритроцитов в 1 л крови (X) Используют формулу Х=А – 1010.

Получают величину Т/л, где Т — Тера, равна 10 .

Определение количества гемоглобина. Наиболее точен гемогло-бинцианидный колориметрический метод. Для анализа берут опытную, стандартную и контрольную пробы. Для подготовки опытной пробы к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 20 мкл (0,02 мл) испытуемой крови, тщательно перемешивают и оставляют стоять в течение 10 мин. Затем колориметрируют при зеленом светофильтре (длина волны 500-
560 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контрольной пробы, в качестве которой берут трансформирующий раствор. Стандартная проба — это стандартный раствор гемоглобинцианида, ее исследуют в том же порядке, что и опытную пробу.

Количество гемоглобина B, Г на 100 мл) определяют по формуле

Н =

ЕопСК×0,001

Ест

Где Еоп — Оптическая плотность опытной пробы; Ест — оптическая плотность стандартной пробы; С — Концентрация гемоглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг на 100 мл); 0,001 — коэффициент для пересчета мг в 1 г; К— Коэффициент разведения крови (251).

Для установления количества гемоглобина в 1 л крови полученную цифру нужно умножить на 10.

Для определения количества гемоглобина в крови можно использовать метод Сали. Он менее точен, чем предыдущий, но прост в исполнении и широко распространен. Гемометр Сали (рис.18) состоит из трех пробирок одного диаметра, помещенных в штатив, задняя стенка которого выполнена из стекла молочного цвета. Средняя пробирка пустая, она отградуирована и предназначена для исследуемой крови. Обе боковые Пробирки запаяны и наполнены стандартным эталонным раствором, содержащим 167 г/л гемоглобина. К гемометру приложены капиллярная пипетка емкостью 20 мм3, пипетка для воды, стеклянная палочка для размешивания.

подпись: рис.18. гемометр 
сали с пипеткой
Принцип определения заключается в том, что под действием разведенной хлористоводородной (соляной) кислоты гемоглобин превращается в солянокислый гематин. Полученный раствор гематина разбавляют в градуированной (средней) пробирке дистиллированной водой до тех пор, пока его цвет не совпадет с цветом стандартных растворов. Количество гемоглобина устанавливают по уровню жидкости в градуированной пробирке в соответствии с имеющейся шкалой.

Для выполнения исследования в градуированную пробирку приливают 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты до метки 0. Из свежей капли крови кролика капиллярной пипеткой набирают 20 мкл. Оттуда кровь (без потерь) приливают к хлористоводородной кислоте в градуированной пробирке, тщательно встряхивают и оставляют стоять в штативе гемометра на 5-10 мин до образования прозрачной бурой жидкости — солянокислого гематина. Дистиллированную воду капают до тех пор, пока цвет жидкости не сравняется с цветом стандартных растворов гемометра Сали. При этих условиях количество гемоглобина будет одинаковым в стандарте и в исследуемой крови. Отсчет ведут по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке, шкала которой показывает абсолютное содержание (г/100 мл) гемоглобина в исследуемой крови. Далее рассчитывают содержание гемоглобина в ммоль/л. Используют формулу

В × 0,3206

Где В — Количество гемоглобина (г/100 мл, г%), 0,6206 — коэффициент пересчета. Например, 5 = 9 г%, тогда 9 ∙ 0,6206 = 5,6 ммоль/л (по системе СИ).

Вычисление цветового показателя (ЦП). Для определения степени насыщенности эритроцитов гемоглобином используют формулу

ЦП=

Нb2×E1

Hb1×E2

Где Hb1 — среднее количество гемоглобина в норме (г/л); НB2Количество гемоглобина у исследуемого животного (г/л); Е1 — среднее число эритроцитов в норме (1 ∙ 1012/л); E2 — среднее число эритроцитов у исследуемого животного (1 ∙ 1012/л).

Вычисление среднего содержания гемоглобина в одном эритроците. Для определения этой величины используют данные о содержании эритроцитов и количестве гемоглобина в 1 мкл (1 л) крови. Для вычисления содержания гемоглобина в одном эритроците (СГЭ), выраженного в пг (1 пг = 1 × 1012 г), применяют формулу

СГЭ =

Hb

Эр

Где НBКоличество гемоглобина в 1 мкл (1 л) крови, пг; Эр — Число эритроцитов в 1 мкл (1 л) крови.

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова. Вычисляют скорость разделения цельной крови на плазму светло-желтой окраски и форменные элементы красной окраски за счет гемоглобина эритроцитов. Для определения берут градуированный стеклянный капилляр (от 0 до 100 мл), промывают его 5%-ным раствором лимоннокислого натрия. Набирают раствор до метки Р (высота 50 мм) и выпускают на часовое стекло. Из капли крови, взятой от кролика, в тот же капилляр дважды набирают кровь до метки К И приливают ее к раствору лимоннокислого натрия в часовое стекло, тщательно перемешивая жидкости. Затем капилляр наполняют цитратной кровью и укрепляют в штативе в строго вертикальном положении (рис.19). Результат оседания эритроцитов отмечают через час. Выражают СОЭ в мм/ч.

Рис.19. Штатив и капилляры для определения СОЭ

Таким образом, у контрольного и интактного кроликов определяют содержание в крови числа эритроцитов, количество гемоглобина, цветовой показатель, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, СОЭ. Используя полученные данные, составляют общую картину изменений красной крови при гемолитической анемии.

Оформление протокола опыта. Кратко описывают принципы определения показателей красной крови, использованные в эксперименте. Выполняют расчеты по рекомендованным формулам, фиксируют в протоколе. Полученные данные вносят в таблицу. Объясняют механизм изменений картины крови при гемолитической анемии.

Метки: