Патология белой крови

Изменения лейкоцитов могут быть количественными и качественными. Увеличие количества лейкоцитов в периферической крови выше нормы называется лейкоцитозом, уменьшение — лейкопенией. Лейкоцитоз бывает абсолютный, относительный, физиологический и патологический. Абсолютный лейкоцитоз характеризуется увеличением общего количества лейкоцитов в единице объема крови, а относительный — увеличением одного вида лейкоцитов за счет другого без увеличения общего количества лейкоцитов. Лейкоцитозы часто могут сопровождаться качественными изменениями в виде появления незрелых форм лейкоцитов или с измененной структурой.

Лейкоцитарной формулой называется процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов. В условиях патологии могут наблюдаться следующие виды лейкоцитозов:

Нейтрофильный — при острых инфекционных и септических заболеваниях (мыт, рожа, перитонит, плеврит), при интоксикациях. Часто нейтрофильный лейкоцитоз сопровождается увеличением общего количества лейкоцитов и увеличением молодых форм нейтрофилов (палочко-ядерных, юных).

Базофильный лейкоцитоз наблюдается при гемофилии, миэлоидном лейкозе.

Эозинофильный — при гельминтозах, при острой форме рожи (до 45%), при аллергических реакциях, недостаточной функции надпочечников, в период выздоровления, при применении антибиотиков.

Лимфоцитоз — отмечается при хронических, инфекционных заболеваниях (туберкулез, чума свиней, инфекционная анемия лошадей).

Моноцитоз — увеличение количества моноцитов отмечается при острых инфекционных заболеваниях в период выздоровления, при заболеваниях, вызванных возбудителями из класса «Простейшие», Моноцитоз является показателем раздражения ретикулоэндотелиальной системы.

Лейкопении развиваются в случаях угнетения функции кроветворной системы токсинами, продуктами распада тканей при тяжелых септических или инфекционных заболеваниях, при интенсивном воздействии на них аллергенов (после переливания крови). Уменьшение идет за счет одного какого-либо вида или равномерного снижения всех видов белой крови. Нередко лейкопения сопровождается значительными дегенеративными изменениями самих лейкоцитов (появление токсической зернистости, жировое перерождение и др.).

Цель занятий: Изучить нормальные и патологические форменные элементы белой крови. Вывести лейкоцитарную формулу в норме и при патологии.

Задание 1. В опытах на животных изучить изменения количественного и качественного состава лейкоцитов. Моделирование лейкоцитоза у кролика.

Оснащение: клетки для кроликов; кюветы; микроскопы; смесители для лейкоцитов; камеры Горяева; шприцы на 5 мл с иглой; предметные стекла; жидкость Тюрка (28 мл); кипяченое молоко (5 мл); краска Романовского (50 мл); 0,9%-ный раствор натрия хлорида (10 мл); 70%-ный раствор этилового спирта (20 мл); кедровое масло (3 мл); подопытные животные: кролики.

Постановка опыта. Берут двух однополых кроликов массой 1,8-
2,5 кг, предварительно выдержанных 24 ч на голодной диете. Первому кролику в стерильных условиях внутрибрюшинно вводят 5 мл кипяченого молока, разведенного 1 : 1 изотоническим раствором натрия хлорида. Второму кролику в брюшную полость вводят 5 мл стерильного изотонического раствора. Спустя 45-60 мин проводят гематологическое обследование обоих кроликов: определяют число лейкоцитов, лейкограмму, лейкоцитарный профиль, индекс регенерации.

Определение числа лейкоцитов. Выстригают, обезжиривают, дезинфицируют край уха кролика. Прокалывают иглой кожу и стенку ушной боковой вены. Первые капли крови удаляют, из последующих капель насасывают кровь в смеситель (меланжер) для лейкоцитов до метки 0,5, вытирают кончик смесителя ваткой, опускают в стаканчик с жидкостью Тюрка (3%-ный раствор ледяной уксусной кислоты — 100мл, 1%-ный раствор метиленового синего или генциана фиолетового — 1 мл) и насасывают до отметки 2. Покачивают смеситель в течение 2-3 мин. За это время уксусная кислота лизирует эритроциты и окрашиваются ядра лейкоцитов. Первые 2-3 капли из смесителя удаляют, четвертой заполняют подготовленную счетную камеру Горяева. Под малым увеличением подсчитывают все клетки, расположенные в 100 больших квадратах.

При подсчете числа лейкоцитов исходят из того, что разведение крови в смесителе 1 : 20, объем счетной камеры над маленьким квадратом 1/4000 мкл, а в одном большом квадрате сетки Горяева 16 маленьких, следовательно, объем над одним большим квадратом будет 16/4000 мкл, а над 100 — 1600/4000 мкл.

Например, в 100 больших квадратах найдено 154 лейкоцита, тогда в 1 мкл крови их будет1600.

Для простоты расчетов число лейкоцитов, найденное в 100 больших квадратах, надо умножить на 50, чтобы получить их количество в 1 мкл крови.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови (X) используют формулу

Х = А × 5 × 107

Где А — число лейкоцитов, найденных в 100 больших квадратах. Получают величину Г/л, где Г — гига, равна 109.

Определение лейкограммы. Готовят мазок крови, высушивают, фиксируют, окрашивают. Закрепляют в препаратоводителе и помещают под иммерсионный объектив. На четыре краевых участка наносят по капле кедрового масла. Один из краевых участков устанавливают в поле зрения. Подсчитывают лейкоциты способом меандров в четырех условных зонах (рис.21), разделенных поперечной и продольной осевыми линиями, визуально проведенными через центр мазка. В каждой зоне надо сосчитать 25 % клеток от требуемого количества (100 или 200). Препаратоводителем перемещают мазок в зоне таким образом, чтобы, продвинувшись на 3-4 поля зрения в глубину мазка, поменять направление приблизительно на два поля зрения в сторону по длине препарата, а затем снова возвращаются к краю мазка. Дойдя до края, снова передвигают его на два поля зрения в сторону по длине препарата, затем возвращаются опять в глубину мазка и т. д.

Рис.21. Подсчет лейкоцитов способом меандров
в четырех условных зонах крови

Насчитав 25 (50) клеток белой крови, исследуют второй участок мазка, затем третий и четвертый. Такая методика счета исключает случайные ошибки, связанные с неравномерностью распределения различных форм по мазку.

Найденные и идентифицированные клетки регистрируют с помощью 11-клавишного механизма счетчика (рис.22), что значительно облегчает и ускоряет исследование.

Рис.22. Механический счетчик для определения лейкограмм

При анализе мазков крови, во время подсчета лейкограммы, обращают внимание на морфологические особенности лейкоцитов.

Патологические формы нейтрофилов могут быть выражены гиперсегментацией ядер, при которой большинство из них состоит из 4-5 и более сегментов. Гиперсегментация ядер часто сочетается с макроцитозом нейтрофильных лейкоцитов. В нейтрофилах обнаруживают также токсическую зернистость протоплазмы, вакуолизацию цитоплазмы и ядра, пикноз (сморщивание) и гипохроматоз ядер, наличие в протоплазме базофильной пунктации — телец Князькова-Деле. Иногда можно встретить распадающиеся клетки (цитолиз) или распадающиеся ядра (кариорексис), ядерные сегменты, не связанные между собой мостками.

Патологически измененные формы эозинофилов отличаются от нормальных неравномерным распределением хроматина в ядре, его гиперсегментацией, наличием в цитоплазме овальных гранул или гранул, окрашенных в красно-фиолетовый цвет.

Патологические формы лимфоцитов характеризуются вакуолизацией протоплазмы, неравномерным окрашиванием ядер, разрыхленностью их субстанции.

Патологическим формам моноцитов свойственны диффузное серое, с желтоватым оттенком окрашивание протоплазмы, наличие в ней вакуолей, полиморфное разрыхленное ядро со слабоокрашенными или неокрашенными участками.

Определение лейкоцитарного профиля. Подсчитав число лейкоцитов в 1 мкл крови у контрольного и подопытного кроликов и зная процентное соотношение элементов белой крови (лейкоцитарная формула), высчитывают их абсолютное количество в заданном объеме. Например, у контрольного кролика в 1 мкл найдено 6500 лейкоцитов, лейкоцитарная формула выведена в следующем виде (%): Б — 1, Э — 2, П — 7, С — 36, Л — 52, М — 2. Принимая общее число лейкоцитов за 100 %, находим, что в 1 мкл крови базофилов будет 65, эозинофилов—130, палочкоядерных нейтрофилов — 455, сегментоядерных нейтрофилов — 2340, лимфоцитов —3380, моноцитов — 130.

Определение индекса регенерации (ядерного сдвига). Этот показатель представляет собой отношение суммы молодых форм нейтрофилов к зрелым. Вычисляют индекс по формуле

%М + %Ю + %П

По индексу регенерации можно судить о возрастном составе нейтрофилов. Увеличение этого показателя свидетельствует об активации миелопоэза, снижении его ингибиции.

Изучив количественный и качественный состав элементов белой крови у здорового и подопытного кроликов, сопоставляют и анализируют полученные данные.

Оформление протокола опыта. Кратко записывают использованные методы гематологического обследования и полученные результаты. Объясняют механизм развития лейкоцитоза при экспериментальном асептическом перитоните. Делают выводы.

Метки: