Цель занятия: изучить методы диагностики лептоспироза, систему профилактических и диагностических мероприятий.
Материалы и оборудование: плакаты, диафильмы, вакцины, диагностикумы. Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Лептоспироз — инфекционная природно-очаговая болезнь диких, домашних животных и человека, широко распространенная в различных ландшафтно-географических зонах мира. Возбудитель — патогенные спирохеты рода Leptospira.
Методы диагностики. Диагноз на лептоспироз устанавливают на основании комплекса данных — эпизоотологических, клинических, патологоанатомических и лабораторных.
Согласно эпчзоопгологчческим данным болеют домашние животные всех видов (чаще свиньи и крупный рогатый скот), любого возраста, но молодняк более восприимчив, и болезнь у него протекает тяжелее, чем у взрослых. Источники возбудителя лептоспирозной инфекции подразделяют на 2 группы. К первой относят грызунов и насекомоядных, которые служат основными хозяевами (резервуаром) возбудителя в природе; ко второй—домашних животных (свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, собак), а также пушных зверей клеточного содержания, формирующих антропургические (сельскохозяйственные) очаги.
Основные клинические признаки болезни: повышение температуры тела, резкое угнетение, слабость, желтушность слизистых Волочек, некроз кожи, нарушения сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, у беременных животных —аборт. Пептоспироз у животных протекает молниеносно, остро, подостро, хронически.
При патологоансипомическом исследовании обнаруживают желтуху или анемию, геморрагический диатез, некроз кожи и слизистых оболочек, дистрофические и воспалительные изменения в паренхиматозных органах. Печень увеличена, от глинисто-красного до охряно-желтого цвета, упругой, дряблой или ломкой консистенции. Желчный пузырь растянут и переполнен густой желчью темно- или буро-зеленого цвета. Почки также увеличены, дряблые. Границы коркового и мозгового слоев сглажены.
Лабораторные методы диагностики включают в себя серологические, бактериологические и гистологические исследования. В лабораторию отправляют кровь, мочу, органы и ткани, а также трупы мелких животных.
Серологический метод основан на обнаружении специфических антител в крови животных реакцией микроагглютинации (РМА) и реакцией иммуноадсорбции (РИА). По результатам серологических исследований диагноз на лептоспироз считают установленным, если специфические антитела обнаружены в сыворотке крови при однократном исследовании в РМА в титре 1 : 100 у вакцинированных и в титре 1 : 50 и выше у более чем 25 % невакцинированных животных. Лептоспироз считают причиной абортов при обнаружении антител в сыворотке крови абортированного плода. Предполагают заболевание при высоком титре антител (1 :2500 и более) в группе абортировавших животных и низком титре (1 : 500) или отрицательной реакции в группе клинически здоровых животных.
Гистологический метод основан на обнаружении лептоспир в гистосрезах, импрегнированных серебром. При микроскопии лептоспиры чаще обнаруживают на поверхности эпителия и в просвете мочевых канальцев почек, несколько реже — в цитоплазме эпителия, преимущественно группами. Лептоспиры окрашиваются в черный цвет, а окружающая ткань — в буровато-желтый.
Бактериологический метод заключается в обнаружении лептоспир в исследуемом материале путем темнопольной микроскопии (рис. 9) и иммунофлюоресцентным методом, выделении чистой культуры на специальных средах, ее идентификациии и дифференциации, биопробе на лабораторных животных.
Посевы культивируют при 20…28 °С в течение 3 мес. Иногда лептоспиры обнаруживают в средах на З…5-е сутки или через 1…2 мес и очень редко — через 2…3 мес культивирования.
Серовариантную принадлежность изолятов лептоспир изучают в РИА: сначала устанавливают се-рогрупповую принадлежность, а затем с помощью перекрестной РМА определяют степень антигенного родства каждого исследуемого штамма со всеми штаммами-эталонами, входящими в состав данной серогруппы. Серогруппо-вую или серовариантную принадлежность культур лептоспир можно установить с помощью моноклональных антител.
Для биопробы используют золотистых хомячков в возрасте 20…30 сут, крольчат-сосунов в возрасте 10…20 сут и морских свинок в возрасте 21… 35 сут, которых
Рис.9.
Культура лептоспир при микроскопии в темном поле
Заражают кровью, мочой, суспензией из паренхиматозных органов животных (абортированного плода) или спермой. Исследуемый материал вводят подкожно или внутрибрюшинно: хомякам от 0,3…0,5 до 1 мл, крольчатам 2…3 мл. На каждую пробу исследуемого материала берут по 2 зверька: одного из них убивают на 4…5-е сутки, в период подъема температуры, другого — на 14…16-е сутки. Кровь последнего исследуют в РМА, начиная с разведения 1:10, с лептоспирами 15 серологических групп. Положительная РМА свидетельствует о наличии лептоспир в исследуемом материале.
Вирулентность выделенной культуры изучают на золотистых хомячках или крольчатах, которых заражают внутрибрюшинно 5…7-дневной культурой, содержащей 70…100 лептоспир в поле зрения микроскопа. Высоковирулентные культуры вызывают гибель животных в дозе менее 0,1 мл, средней вирулентности — 0,2… 0,4мл и слабовирулентные — 0,5…1,0 мл.
По результатам бактериологических исследований диагноз на лептоспироз считают установленным, а хозяйство — неблагополучным по лептоспирозу в любом из следующих случаев:
При обнаружении методом микроскопии лептоспир в крови или суспензии из органов животных, абортированном плоде, моче или органах зараженных лабораторных животных;
Обнаружении методом флюоресцирующих антител в исследуемом материале бактерий с морфологией, типичной для лептоспир, при интенсивности свечения не менее чем в два креста;
Выделении культуры лептоспир из исходного материала или органов лабораторного животного, зараженного исходным материалом.
Лептоспироз считают причиной:
Гибели животных—при наличии клинических признаков и патологических изменений, характерных для лептоспироза, специфичность которых подтверждена обнаружением лептоспир в крови паренхиматозных органах;
Абортов—при обнаружении лептоспир в органах (тканях) Сортированного (мертворожденного) плода.
Профилактические и оздоровительные мероприятия. Чтобы своевременно выявить лептоспироз, исследуют сыворотку крови животных: в племенных хозяйствах — всех производителей 2 раза в год’ свиней, крупный и мелкий рогатый скот, лошадей — поголовно перед ввозом (вывозом) для племенных и пользовательных целей (за исключением откормочной группы); во всех случаях при подозрении на лептоспироз.
Чтобы не допустить заноса заболевания в хозяйство, необходимо:
Контролировать клиническое состояние животных, число абортов и при подозрении на лептоспироз отправлять материал для лабораторного анализа;
Исследовать всех поступающих в хозяйство животных в период 30-дневного карантина на лептоспироз в РМА в разведении сыворотки 1 : 25 (свиней, ввозимых в хозяйство для племенных целей, — путем микроскопии мочи независимо от результатов серологических исследований); не выпасать невакцинированных животных на территории природных очагов лептоспироза;
Систематически уничтожать грызунов в животноводческих помещениях, на территории ферм и в местах хранения кормов.
Разрешается комплектовать откормочное хозяйство клинически здоровыми животными без обследования на лептоспироз, но с обязательной вакцинацией их против лептоспироза в период карантина.
При установлении диагноза на лептоспироз в хозяйстве вводят ограничения и в плане оздоровительных мероприятий предусматривают необходимые диагностические исследования животных, ветеринарно-санитарные и организационно-хозяйственные мероприятия.
После клинического осмотра больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют, лечат гипериммунной сывороткой и антибиотиками, указанными в наставлениях по их применению.
Убой таких животных разрешен на санитарной бойне. Помещение и оборудование после убоя дезинфицируют. Если установлен лептоспироз и обнаружены дегенеративные изменения мышц или их желтушное окрашивание, не исчезающее в течение 2 сут, тушу и внутренние органы направляют на утилизацию. При отсутствии дегенеративных изменений в мышцах, но при наличии желтушного окрашивания, исчезнувшего в течение 2 сут, тушу, а также внутренние органы без патологоанатомических изменений выпускают после проварки. Кишечник и патологически измененные органы направляют на утилизацию.
Туши и другие продукты, полученные от убоя животных с положительным результатом серологического исследования на лептоспироз, но без клинических признаков или патологоанатомических изменений в мышечной ткани и органах, выпускают без ограничений.
Клинически здоровых животных всех видов и возрастных групп, восприимчивых к лептоспирозу, вакцинируют. Животных, которых лечили, вакцинируют через 5…7 дней после выздоровления.
Всех животных откормочных хозяйств откармливают и сдают на убой. Маточное поголовье, производителей и ремонтный молодняк, который необходимо сохранить для воспроизводства, после вакцинации обрабатывают лептоспироцидными препаратами и переводят в продезинфицированные помещения.
Сперму производителей, инфицированных лептоспирами (положительная РМА, лептоспиры в моче), не используют и исходя из хозяйственной целесообразности направляют таких животных на убой или обрабатывают стрептомицином, дезинфицируют помещения. Все поголовье вакцинируют против лептоспироза. Через 10…15 дней эффективность лечения контролируют путем микроскопии мочи. При обнаружении лептоспир в моче повторяют курс лечения и вновь проверяют его эффективность. От быков, признанных здоровыми, продолжают использовать сперму.
Сыворотку крови повторно исследуют в РМА и микроскопируют мочу всех производителей на ранее неблагополучном по лептоспирозу предприятии (станции) через 3 мес и при получении отрицательных результатов —далее каждые 6 мес.
В питомниках служебного собаководства изолируют клинически больных и подозрительных по заболеванию собак, лечат их гипериммунной сывороткой и стрептомицином. Всех остальных собак вакцинируют.
Ограничения в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах снимают в следующем порядке:
В откормочных хозяйствах — после сдачи поголовья на убой и заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий;
В племенных и пользовательных хозяйствах — после установления их благополучия по лептоспирозу с помощью лабораторных методов;
Животных повторно исследуют на лептоспироз в ранее неблагополучных хозяйствах через 6 мес после снятия ограничений;
Хозяйство считают благополучным по лептоспирозу при получении отрицательных результатов исследований всех животных.
Разрешается вывозить животных для племенных и пользовательных целей только из хозяйств, благополучных по лептоспирозу.
Животных, предназначенных для продажи, содержат в карантине и исследуют сыворотку крови в РМА, у свиней, кроме того, — мочу на наличие лептоспир. При выявлении у отдельных животных антител в крови или лептоспир в моче всю группу оставляют в хозяйстве и применяют дополнительные методы диагностики, чтобы решить вопрос о благополучии хозяйства по лептоспирозу.
Для специфической профилактики используют: поливалентную вакцину ВГНКИ и концентрированную вакцину против лептоспироза животных; ассоциированную вакцину против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней; ассоциированную вакцину против лептоспироза и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота; ассоциированную вакцину против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота; вакцину против лептоспироза собак; инактивированную жидкую вакцину против лептоспироза; вакцину против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза собак («Гексаканивак»).
Во всех случаях выбор вакцины зависит от эпизоотической обстановки хозяйства. Вакцинируют всех восприимчивых животных в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах; в откормочных хозяйствах, где поголовье комплектуют без обследования на лептоспироз; при выпасе животных в зоне природного очага лептоспироза; при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует в РМА; в районах с отгонным животноводством.
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Разработать схему дифференциальной диагностики болезней, сопровождающихся абортами (бруцеллез, лептоспироз, хламиди-оз, листериоз, кампилобактериоз, инфекционный ринотрахеит).