Цель занятия: изучить методы диагностики бруцеллеза.
Материалы и оборудование: безыгольный инъектор или набор для аллергических исследований, набор для постановки РБП, иглы для взятия крови, набор диагностикумов, позитивных сывороток, антигенов, противобруцеллезные вакцины; бруцеллин ВИЭВ, дезсредства.
Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Бруцеллез — хронически протекающая инфекционная болезнь животных, вызываемая бактериями рода Brucella, в который входят 6 самостоятельных видов: В. melitensis — возбудитель бруцеллеза у коз и овец, В. abortus — у крупного рогатого скота, В. suis — у свиней, северных оленей, зайцев, В. ovis—у овец, В. canis—y собак, В. neotomae — у древесных крыс. В. melitensis и В. abortus могут мигрировать на животных других видов. От больных животных могут заразиться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.
Диагноз на бруцеллез основан на результатах бактериологических, серологических, аллергических исследований и клинико-эпизоотических данных.
Клинические признаки болезни у животных нехарактерны — аборты, артриты, бурситы, эндометриты, вагиниты, орхиты, эпидидимиты могут встречаться при многих других заболеваниях.
Патологоанатомические изменения при бруцеллезе также малохарактерны. Самый надежный и точный диагноз—лабораторный, т. е. выделение и дифференциация возбудителя.
При лабораторных исследованиях возбудителя обнаруживают тремя методами: бактериоскопией мазков, выделением чистой культуры из исходного материала и, при необходимости, методом биопробы на морских свинках.
Мазки окрашивают по Граму, Козловскому, Шуляку—Шину, Стампу. Бруцеллы — мелкие грамотрицательные коккобактерии, располагаются попарно или кучно. При окраске по Козловскому, Шуляку—Шину, Стампу клетки бруцелл красного цвета.
Для культивирования бактерий используют мясопептонный печеночный бульон (МППБ), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон (ПГГБ), картофельный агар и др. Посевы помещают в термостат при 37…38 °С и просматривают каждые 3…4 дня до 30 дней. В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное кольцо, в дальнейшем — небольшой осадок на дне пробирки. На агаре растут в виде мелких блестящих выпуклых просвечивающихся колоний сероватого оттенка. Выделенные культуры идентифицируют в реакции агглютинации (РА) на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой.
Для биопроб используют двух морских свинок массой 350…400 г, предварительно проверенных на бруцеллез серологическим методом (отрицательный результат РА в разведении 1 : 5).
Суспензию исходного материала на стерильном физиологическом растворе (соотношение 1:10) вводят подкожно с внутренней стороны бедра морским свинкам в дозе 1 мл. На 15, 25, 40-й день сыворотки крови свинок исследуют в пробирочной РА в разведении от 1 : 10 до 1 : 80. При положительной РА (в разведении 1 : 10 и выше) морских свинок убивают, материал от них исследуют бактериологическим методом. При отрицательной РА биопробу считают отрицательной.
При массовых исследованиях большое значение имеют серологические и аллергические методы диагностики бруцеллеза:
У крупного рогатого скота, яков, зебу, буйволов — серологический: РА в пробирках, реакция связывания комплемента (РСК) или реакция длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатая реакция агглютинации с Роз-Бенгал антигеном — Роз-Бенгал проба (РБП), кольцевая реакция с молоком (КР), реакция иммунодиффузии с О-ПС-антигеном (РИД);
У овец, коз, оленей, маралов, лошадей, верблюдов—серологический: РА, РСК/РДСК, РБП; аллергический;
У свиней — серологический: РСК/РДСК, РБП; аллергический;
У собак и животных других видов — серологический: РА, РСК.
Повторно животных исследуют на бруцеллез серологическим методом через 15…30 дней, аллергическим — через 25…30 дней.
Коров (нетелей), буйволиц, верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок— через 1…2 мес после родов, молодняк животных всех видов — начиная с 4-месячного возраста.
Крупный и мелкий рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, исследуют в порядке и в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины, и оценивают их состояние
По бруцеллезу.
Заболевание бруцеллезом считают установленным при выделении культуры бруцелл из биоматериала, положительной биопробе или при положительных результатах следующих серологических исследований невакцинированных животных: крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей — одновременно в РИД и РА с титром антител 200 МЕ/мл и выше; овец и коз — в РА с титром антител 100 МЕ/мл и выше; оленей (маралов) и собак—в РА с титром антител 50 МЕ/мл и выше; животных всех видов — в РСК в разведении сыворотки 1 : 5 и выше.
При положительных результатах серологических исследований невакцинированных животных: крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов, лошадей — только в РА с титром антител 50…100 МЕ/мл; овец, коз, оленей (маралов) в РА с титром антител 25…50 МЕ/мл — обследуют повторно через 15…30 дней. При повышении титров заболевание считают установленным;
Если титры остались прежними, прибегают к дополнительным исследованиям (согласно утвержденным Правилам).
Заболевание считают установленным, если в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота выявлены ранее не вакцинированные животные, положительно реагирующие в РА с титром антител 100 МЕ/мл и выше или (и) в РСК (РДСК) в разведении 1 : 5 и выше.
Иммунизированные отары овец и коз признают неблагополучными по бруцеллезу при положительном результате бактериологического исследования абортированных плодов или положительной биопробе, а также при выявлении среди баранов-производителей, пробников и ярок животных, положительно, реагирующих в РА с титром антител 100 МЕ/мл и выше, РСК в разведении сыворотки 1 : 5 и выше.
Свиней признают больными бруцеллезом, если аллергическая проба подтверждается положительной РСК.
Бруцеллин вводят свиньям с наружной стороны ушной раковины в дозе 0,2 мл. Реакцию учитывают через 24 и 48 ч пальпацией места инъекции. У больных животных на месте введения аллергена отмечают воспалительную реакцию в виде припухлости плотной или тестоватой консистенции. У здоровых местная реакция отсутствует.
Результаты обследования крупного рогатого скота в РИД и КР оценивают в соответствии с наставлениями по постановке и учету этих реакций.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
1. Исследовать под микроскопом готовые препараты.
2. Описать рост культуры бруцелл на питательных средах.
3. Оценить результаты заранее поставленных РА в пробирке и КР с молоком.
4. Поставить и учесть РБП на бруцеллез (рис. 8).
