При работе с семенем требуется не только чистота, но и стерильность всей посуды, инструментария, материалов и растворов.
Подготовка полученного семени, проводимая быстро, без малейших промедлений осеменатором-гинекологом и его помощником, состоит в следующем.
A. Переливание семени из семяприемника в стерильную стеклянную градуированную посуду с крышкой, определение объема семени.
Б. Макроскопическая оценка семени, главным образом по ее цвету и оттенку.
B. Микроскопическая проверка неразбавленного семени на чистоту, густоту, на подвижность живчиков.
Г. Разбавление семени.
Д. Микроскопическая проверка разбавленного семени на чистоту, густоту, на подвижность живчиков.
Е. Проверка семени на длительность переживания.
Прежде чем приступить к подготовке семени, осеменатор и его помощник быстро моют и дезинфицируют руки, после этого не прикасаются ими ни к чему, кроме стерильной посуды, инструментов, материалов и растворов.
А. Семя из резинового семяприемника в "стеклянную стерильную градуированную посуду (мензурку, стакан) переливают осторожно через марлевую стерильную салфетку (в четыре слоя), на которой задерживаются случайные загрязнители (волос) и тягуче-слизистый, полупрозрачный, очень вязкий и густой секрет придаточных половых желез. У некоторых жеребцов этого секрета в эякуляте бывает до 100 мл и больше. У всех жеребцов, как правило, наибольшее количество этого секрета бывает в начале случного сезона.
Семя как в семяприемнике, так и после переливания из него в мензурке или в стакане всегда должно быть накрыто плоской стеклянной крышкой.
Из простого стенда заранее нарезают достаточное количество крышек соответствующей величины и формы, протирают их разведенным спиртом и употребляют для предохранения от загрязнения не только семени, но и стерильных растворов и материалов (разбавитель, ватные тампоны и т. д.).
В градуированной посуде легко определить объем эякулята в миллиметрах. Последний неодинаков даже у одних и тех же жеребцов в разное время и при различных условиях.
Чистокровные арабские жеребцы дают 35—50 мл семени, жеребцы буденновской породы—50—100 мл, а среди чистокровных верховых жеребцов в этом отношении наблюдается большое разнообразие. Так, жеребцы Симони-дес, Сайгон давали по 35—45 мл семени, а жеребец Фляж-Бай—250 мл.
Отсюда видно, насколько различна половая производительность жеребцов. Если разбавленным семенем жеребца Симонидес за сезон можно осеменить примерно 60—80 кобыл, то разбавленным семенем жеребца Фляж-Бай за то же время можно, без особых затруднений, осеменить 400—500 кобыл и более.
Б. При макроскопической оценке семени особое внимание обращают на его цвет, оттенок, органические (моча, кровь, смегма, волосы, мочевой песок) и неорганические примеси.
Для искусственного осеменения пригодно семя с ясным молочнобелым оттенком, чистое, без всяких примесей, загрязнений и осадков.
В. После макроскопической оценки семени немедленно приступают к микроскопической проверке неразбавленного семени на чистоту, густоту и подвижность. Среднюю по величине каплю семени берут стерильной стеклянной палочкой на чистое предметное стекло, покрывают чистым покровным стеклом и рассматривают под микроскопом при малом или среднем увеличении.
Оценка семени под микроскопом проводится по разработанной Всесоюзным институтом животноводства системе.
Г. После микроскопической проверки семени немедленно приступают к его разбавлению. Стерильные растворы разбавителя к этому моменту должны быть готовы
Таблица 15
Оценка семени жеребцов по данным микроскопического исследования
Условное обозначение |
Густота семени |
||||
Активность живчиков |
Насколько поле зрения заполнено живчиками |
||||
Густо |
Средне |
Редко |
Живчиков нет |
||
Поступательное движение Все 100% активно двигаются |
1 0,9 0,8 0,7 0,6 |
Г Г—1 Г—0,9 Г—0,8 Г—0,7 Г—0,6 |
С С—1 С—0,9 G—0,8 С—0,7 |
Р Р—1 Р—0,9 Р-0,8 |
А |
90% активно двигаются, а 10% неподвижны и 80% активно двигаются, а 20% неподвижны и слабоподвижны…. |
— |
||||
70% активно двигаются, а 30% неподвижны и |
Р—0,7 Р—0,6 Р—0,5 |
— . |
|||
60% активно двигаются, а 40% неподвижны и слабоподвижны…. |
С—0,6 С—0,5 С-0,4 |
— |
|||
50% активно двигаются, а 50% неподвижны и слабоподвижны |
0,5 0,4 0,3 |
Г-0,5 Г—0,4 Г—0,3 |
|||
40% активно двигаются, а 60% неподвижны и слабоподвижны…. |
Р—0,4 Р—0,3 Р-0,2 Р—0,1 РК РН |
— |
|||
30% активно двигаются, а 70% неподвижны и |
С—0,3 С—0,2 С—0,1 Ск сн |
— |
|||
20% активно двигаются, а 80% неподвижны и 10% активно двигаются, а 90% неподвижны и Только колебательное дви- |
0,2 0,1 К Н Азо Асп |
Г—0,2 Г—0,1 Гк гн |
— |
||
Нет движения живчиков Нет в семени живчиков ~- азооспермия Полное отсутствие семени—аспермия |
— |
Продолжение
Условное обо-зяаче- .. ние |
— Густота семени |
||||
Активность живчиков |
Насколько поле зрения заполнено живчиками |
||||
Густо |
Средне |
Редко |
Живчиков нет |
||
Агглютинация (быстрое склеивание живчиков, образующих неподвиж- Лейкоцитоз (белые кровяные шарики между живчиками) Бактериоспермия (микробы между живчиками) |
Агг. Лкц. Б-С. |
Г. Агг. Г. Лкц. Г. Б-С. |
С. Агг. С. Лкц. С. Б—С. |
Р. Агг. Р. Лкц. Р. Б-С. |
— — |
Примечание. Семя с оценкой, указанной выше толстой ломаной линии, годно для искусственного осеменения; семя с оценкой, указанной ниже этой линии, непригодно для искусственного осеменения. Тонкая ломаная линия отделяет данные (выше линии), характеризующие семя, годное при естественной случке, от данных (ниже линии), характеризующих негодное семя.
И иметь температуру, близкую к температуре полученного семени. Большая температурная разница между семенем и разбавителем вызывает гибель от шока многих живчиков.
Профессор В. К. Милованов, П. Н. Скаткин, Г. В. Паршутин и др. предложили следующие разбавители для семени жеребцов.
Глюкозо-сульфатный. Состав разбавителя: вода дестиллированная 100 мл, глюкоза безводная чистая 5,76 г, натрий сернокислый безводный 0,34 г.
Глюкозо-тартратный. Состав разбавителя: вода дестиллированная 100 мл, глюкоза безводная 6,85 г,, калий (натрий) виннокислый 0,15 г, виннокаменная кислота 0,008 г.
Разбавители семени пригодны только в первый день их приготовления. Употребление их на следующий день не допускается, так как в них быстро культивируются грибки, вызывающие брожение.
Мы применяли глюкозо-сульфатный разбавитель при осеменении около 2 тысяч кобыл, получили очень хороший результат (по отдельным табунам оплодотворяемость достигала 90%) и пришли к выводу, что этот разбавитель вполне пригоден для широкого применения.
3. Раствор глюкозы (7,2%). Этот разбавитель предложен П. Н. Скаткиным и Г. В. Паршутиным (Всесоюзный научно-исследовательский институт коневодства).
В 1939 г, семенем с этим разбавителем нами с ветеринарным врачом К. С. Гончаренко осеменены 45 кобыл, а ветеринарным врачом И. М. Краковым 30 кобыл. Получены хорошие результаты (86—92% зажеребляемости), позволившие сделать вывод, что глюкозный разбавитель не уступает глюкозо-сульфатному.
Это полностью подтвердила последующая практика искусственного осеменения более тысячи кобыл конных
Заводов.
4. Глюкозо-желточный. Разбавитель готовят по следующей прописи: воды дестиллированной 100 мл, глюкозы 7 г, свежего куриного желтка 0,8 мл (0,75 г). Этот разбавитель, судя по последним опытам, значительно превосходит перечисленные выше: разбавленное им семя жеребцов живет при температуре 0° до 8—12 суток и сохраняет оплодотворяющую способность до 3—4 суток. Внедрение этого разбавителя в широкую производственную практику еще более повысит оплодотворяемость кобыл.
В последнее время ветеринарный врач Н. Н. Михайлов сообщил о своих удачных опытах с применением молочных разбавителей семени.
Семя нужно разбавлять очень осторожно, медленно приливая к нему (а не наоборот) подогретый до его температуры разбавитель, помешивая стеклянной стерильной палочкой.
Д. Разбавленное семя сейчас же проверяют под микроскопом и приступают к осеменению кобыл.
В дневник осеменений записывают время получения семени, его количество,. степень разбавления и оценку цельного и разбавленного семени.
Микроскопия и оценка разбавленного семени не отличаются от микроскопии и оценки цельного семени.
В начале случного сезона, особенно от жеребцов неизвестных, молодых (первого года случки), сомнительных по случной и плодовой деятельности, проявляющих те или иные подозрительные признаки, необходимо брать пробы неразбавленного и разбавленного семени для проверки на длительность переживания живчиков.
Контроль живчиков на длительность переживания имеет решающее значение для правильной оценки и характеристики семени. Мы считаем, что этот контроль должен проводиться в отношении жеребцов, используемых не только для целей искусственного осеменения, но и при ручной и косячной случке. Дело в том, что плодовитость жеребцов определяется не столько объемом эякулята, концентрацией и подвижностью живчиков в первые часы после получения семени, сколько длительностью переживания живчиков вне организма и особенно в организме (в матке) кобылы.
Из опыта проведения косячной и ручной случки мы знаем много жеребцов, которые при сравнительно небольшом количестве садок за сезон из года в год дают очень высокую зажеребляемость кобыл, в то время как многие другие жеребцы при большем количестве садок дают значительно меньшую оплодотворяемость кобыл.
Следовательно, в первом случае семя жеребцов долго живет в матке у кобыл и оплодотворяет последних даже тогда, когда овуляция происходит через несколько десятков часов после их покрытия.
От длительности переживания живчиков главным образом и зависит оплодотворяющая способность жеребцов.
На длительность переживания семени нужно ориентироваться при характеристике и оценке его, при назначении сроков повторных покрытий и осеменений кобыл, установлении сезонной случной нагрузки кобыл на жеребцов.
Например, жеребец Ксандер давал редкое семя 0,8-Р с переживаемостью 40—50 часов, а жеребец Пельхенд— густое семя 0,8-Г с переживаемостью 25—35 часов. Рассуждая теоретически, можно предположить, что жеребец Ксандер более плодовит. Действительно, в течение ряда лет Ксандер, несмотря на малую концентрацию живчиков в семени, был более-плодовит, чем Пельхенд.
В 1931г. стрелецкому чистопородному жеребцу Цилиндру, родоначальнику лошадей терской породы, было 20 лет. Он начал давать очень редкое семя (30—40 живчиков в поле зрения микроскопа). Ввиду исключительной ценности Цилиндра для этой породы, он был использован для искусственного осеменения определенных элитных и племенных кобыл. Семя Цилиндра вводилось нами кобылам по два-три шприца, т. е. по 40—60 мл. Несмотря на то, что оно было очень редкое, бралось при помощи губки, мы получили в 70—73% случаях зажеребляемость кобыл.
На основании этих и дальнейших наблюдений мы пришли к выводу, что при проведении ручной случки и искусственного осеменения не следует опасаться применения редкого семени с длительной переживаемостью (40 часов и больше), наоборот, нужно опасаться применять среднее и густое семя с короткой переживаемостью (10—12 часов).
Глюкозный разбавитель при одних и тех же степенях разбавления неодинаково действует на семя различных жеребцов.
Так, семя чистокровного верхового жеребца Боделэра (Г-0,9) при разбавлении 1 :5 оценивается как Р-0,7 и обладает хорошей оплодотворяемостью, а семя донского помесного жеребца Саксагена (Г-0,8), будучи разбавлено в том же соотношении, оценивается как Р-0,3 и почти совершенно теряет оплодотворяющую способность (зажеребляемость в 10—20% случаев). Семя жеребцов Дейли-Мейля и Бостона в разбавлении 1: 3 и 1 : 4 в очень сильной степени изменяется и теряет оплодотворяющую способность в то время, как семя жеребцов Боделэра, Фуша, Вассала даже в разбавлении 1 : 5 и 1 :6 сохраняет оплодотворяющую способность.
Поэтому для семени каждого жеребца нужно устанавливать ту предельную максимальную степень разбавления, которая не снижает оплодотворяющей способности и других качеств семени, и не применять разбавления выше этого предела.
Определение длительности переживания живчиков, а следовательно, длительности сохранения ими оплодотворяющей способности, имеет особенно большое значение в связи с увеличением объема работ по осеменению кобыл транспортированным семенем.
Перевозка семени с недостаточной переживаемостью недопустима. При организации искусственного осеменения транспортированным семенем необходимо ориентироваться на жеребцов с длительной переживаемостью живчиков.
Для осеменения кобыл непригодно семя:
А) грязно полученное—с примесью волос, смегмы на поверхности или в осадке;
Б) с заметной примесью мочи (запах мочи, желтоватый цвет) или мочевого песка;
В) с примесью крови (розоватый или розово-красный оттенок);
Г) с примесью гноя (желтоватая или бурая вязкая слизь. Необходимо микроскопическое исследование);
Д) с оценкой Г-0,5; С-0,6; Р-0,7 и ниже;
Е) с недостаточной переживаемостью живчиков (меньше 30—40 часов);
Ж) с быстро наступающей агглютинацией многих живчиков;
З) с лейкоцитами в поле зрения микроскопа (подозрение на бактерио — или токсиноспермию);
И) со значительной примесью разнообразных органических и неорганических веществ, по данным микроскопического исследования;
К) с большим количеством вазелина.
Температура воздуха в комнате № 1, где проводят работу с семенем, должна быть не менее 14—15°. При более низкой температуре воздуха семя и разбавитель подогревают до 25° на водяной бане; наоборот, когда в комнате № 1 температура выше 25°, семя и разбавитель охлаждают до 25-30°.
При ручной и косячной случке могут быть использованы жеребцы с семенем пониженного качества (Г-0,3; С-0,4; Р-0,5, но не ниже) и с переживаемостью живчиков 20—30 часов (но не менее). Дело в том, что при естественной случке семя непосредственно попадает в полость матки, не испытывает внешних влияний (давление, влажность, температура, свет, разбавление), не подвергается переливанию, передержке в семяприемнике, мензурке, шприце, катетере и т. д., что имеет место при искусственном осеменении. В последнем случае семя расходует очень много энергии и частично теряет оплодотворяющую способность. Вот почему для искусственного осеменения не должно применяться семя пониженного качества (Г-0,5; С-0,6; Р-0,7; переживаемость 30—40 часов и меньше). От такого семени нельзя получить высокой оплодотворяемости кобыл.