Цель занятий. Изучить этиологию, патогенез и последствия расстройств функций органов пищеварения.
Задание 1. Изучить нарушения процессов пищеварения в желудке.
Опыт 1. Влияние реакции среды содержимого рубца на жизнедеятельность инфузорий.
Оснащение: шприц Жанэ на 150-200 мл (1); зевник (1); зонд желудочный (1); микроскопы (15); нагревательные столики (15); колбы с воронкой и марлевой салфеткой (2); 0,05%-ный раствор натрия гидроксида (100 мл); 1,5%-ный раствор молочной кислоты (30 мл); подопытные животные: овца или 10-12-месячный теленок (1).
Постановка опыта. Жизнедеятельность инфузорий изучают в содержимом рубца. Содержимое рубца получают от овец или крупного рогатого скота с помощью зонда и зевника. Удобно пользоваться деревянным зевником с отверстием посередине. Зевник фиксируют тесемками за рога или на затылочной части головы. В качестве зонда можно использовать упругий резиновый шланг нужного диаметра. Содержимое рубца через зонд набирают в шприц Жанэ. Непосредственно перед занятием или во время его содержимое фильтруют шерез один слой марли. Фильтрат используют в опыте. Жизнедеятельность инфузорий сохраняется в течение одних суток при содержании в термостате при 37 °С.
Наблюдение ведут под малым увеличением микроскопа с нагревательным столиком. Готовят три висячие капли. Для этого берут три предметных стекла с луночками, вокруг которых делают ободок из вазелина. Капли делают на покровных стеклах. На три покровных стекла наносят по небольшой капле содержимого рубца. Затем на первое стекло добавляют каплю воды, на второе — каплю 1,5%-ного раствора молочной кислоты (0,17 моль/л), на третье — каплю 0,05%-ного раствора натрия гидроксида (1,25 моль/л). Жидкости перемешивают стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой с запаянным концом. Затем каждое предметное стекло с луночкой, вокруг которой сделан ободок из вазелина, прикладывают к покровному стеклу и быстро, чтобы капля не растеклась, препарат переворачивают вверх покровным стеклом. Тут же помещают препарат под микроскоп и наблюдают за подвижностью инфузорий до прекращения их подвижности во втором и третьем препаратах.
Оформление протокола опыта. Схему постановки опыта и результаты исследований заносят в таблицу. Анализируют ее и делают выводы.
В заключении и выводах отмечают влияние высокой кислотности и щелочности среды на инфузории. Объясняют, каким образом регулируется реакция среды в рубце.
Опыт 2. Оценка нарушения секреторной функции желудка.
Оснащение: бюретки на 25 мл (15); желудочный сок от здорового животного (150 мл); желудочный сок от каждого больного животного (150 мл); спиртовой 0,5%-ный раствор диметиламидоазобензола (10 мл); 0,1 н. раствор гидроксида (0,1 моль/л) (100 мл); 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина (10 мл); раствор натрия ализаринсульфоната (10 мл); молочноацетатная смесь (500 мл).
Постановка опыта. Нарушение желудочной секреции оценивают по показателям кислотности и ферментативной активности желудочного сока.
Определение свободной хлористоводородной (соляной) кислоты. В химический стаканчик вносят 5 мл профильтрованного желудочного сока, добавляют 2-3 капли 0,5%-ного спиртового раствора диметиламидоазобензола и титруют из бюретки раствором натрия гидроксида до появления желтого окрашивания.
Свободная хлористоводородная (соляная) кислота выражается в единицах титра, которые соответствуют количеству миллилитров натрия гидроксида, пошедших на нейтрализацию 100 мл желудочного сока. Поэтому количество миллилитров натрия гидроксида, пошедшее на нейтрализацию 5 мл желудочного сока, умножают на 20.
Например, на титрование 5 мл желудочного сока пошло 2 мл натрия гидроксида. Содержание свободной хлористоводородной кислоты в 100 мл желудочного сока составит 2 мл ∙ 2 = 40 титрационных единиц.
Определение общей кислотности. К порции желудочного сока, в которой определяли количество свободной хлористоводородной кислоты, прибавляют 2-3 капли 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина. Титруют из бюретки 0,1 н. раствором натрия гидроксида до появления розового окрашивания. Количество миллилитров натрия гидроксида, пошедшее на титрование в первом и втором случаях, суммируют и умножают на 20. Произведение составит общую кислотность в титрационных единицах.
Например, при определении свободной хлористоводородной кислоты пошло 2 мл натрия гидроксида, а при определении общей кислотности израсходовано дополнительно 1 мл. Общая кислотность составит (2 мл + 1 мл) 20 = 60 титрационных единиц.
Определение связанной кислоты. В стеклянный стаканчик вносят 5 мл новой порции профильтрованного желудочного сока и добавляют 2-3 капли индикатора — натрия ализаринсульфоната. Титруют 1 н. (0,1 моль/л) раствором натрия гидроксида до появления фиолетового окрашивания. Количество миллилитров натрия гидроксида умножают на 20. Данный индикатор выявляет все кисло-тореагирующие вещества в желудочном содержимом, за исключением связанной хлористоводородной кислоты. Поэтому для ее определения результат титрования с натрия ализаринсульфонатом вычитают из показателя общей кислотности.
Например, при титровании с натрия ализаринсульфонатом пошло 2,5 мл раствора натрия гидроксида. Кислотность составит 50 единиц (2,5 мл-20). При общей кислотности, равной 60 ед., связанная хлористоводородная кислота составит 10 ед. (60-50).
Определение ферментативной активности желудочного сока по методу Пятницкого. Метод основан на створаживании молока с образованием параказеиногена молочно-ацетатной смеси, катализируемой пепсином. В пробирку вносят 0,1 мл желудочного сока. В другую пробирку наливают 5 мл молотно-ацетатной смеси, состоящей из равных объемов свежего молока и ацетатного буфера с рН 5,0 (45 г натрия гидроксида и 92 г ледяной уксусной кислоты растворяют в 1 л дистиллированной воды).
Обе пробирки помещают в водяную баню температурой 35 °С на 5 мин для выравнивания температуры жидкостей в пробирках. Затем молочно-ацетатную смесь быстро переливают в пробирку с желудочным соком, встряхивают и одновременно включают секундомер. Держа пробирку с молочноацетатной смесью в бане, следят за моментом появления на стенках пробирки, которую постепенно поворачивают, первых сгустков параказеиногена. В этот момент, указывающий на завершение реакции, выключают секундомер.
За единицу пепсина принимают то его количество, которое свертывает 5 мл молочно-ацетатной смеси за 60 с. Для расчета единиц пепсина 1 мл желудочного сока 60 с делят на число секунд, полученных в опыте, и частное от деления умножают на 10 (так как для опыта брали 0,1 мл желудочного сока).
Например, при исследовании желудочного сока сгустки параказеиногена появились за 30с. Количество единиц пепсина в этой пробе составит (60 : 30) 10 = 20.
После ознакомления с методикой определения кислотности и активности ферментов приступают к основным исследованиям. Исследуют не менее двух проб сока. Одна проба — желудочный сок от здорового животного, другая — желудочный сок от особи того же вида с желудочной патологией. В каждой пробе желудочного сока определяют содержание свободной хлористоводородной кислоты, общую кислотность, связанную соляную кислоту и ферментативную активность (по методу Пятницкого). Работу начинают с определения кислотности и ферментативной активности желудочного сока здорового животного, а затем по такой же схеме изучают желудочный сок животных с желудочной патологией.
Оформление протокола опыта. Результаты исследования записывают в таблицу.
Результаты исследования желудочного сока больных животных сравнивают с показателями, полученными в пробах сока нормальной особи. Делают выводы. В заключении и выводах отмечают отклонения кислотности и ферментативной активности сока больных животных, возможные нарушения пищеварения и эвакуации корма из желудка.
Задание 2. Изучить токсичность экстрактов, полученных из содер-жимого различных отделов желудочно-кишечного тракта животных. Влияние экстрактов содержимого желудка и кишечника на поведение мышей.
Оснащение: шприцы на 1 мл с иглами; экстракт содержимого желудка; экстракт содержимого тонкого кишечника (10 мл); экстракт содержимого толстого кишечника (10 мл); подопытные животные: мыши (6).
Постановка опыта. Экстракты содержимого желудка и кишечника готовят заранее. Содержимое желудочно-кишечного тракта более токсично у собак после кормления мясом. Его получают из фистул или после усыпления собаки. На 1 часть содержимого желудка, тонкой или толстой кишки берут 10 частей изотонического раствора натрия хлорида. Содержимое перемешивают, оставляют на 24 ч, затем фильтруют и используют в опыте.
Подбирают трех мышей, примерно одинаковых по массе тела. Всем трем мышам внутрибрюшинно вводят по 1 мл экстракта: первой — из содержимого желудка, второй — из содержимого тонкого кишечника, третьей — из содержимого толстого кишечника. Мышей метят краской и помещают под стеклянный колпак или воронку. Наблюдение ведут в течение 30-45 мин.
Оформление протокола опыта. Отмечают изменение поведения мышей в зависимости от токсичности разных экстрактов. Делают выводы. Отмечают природу веществ, которые обусловливают токсичность содержимого кишечника.
Вопросы для контроля знаний:
1. Формы нарушения аппетита и жажды. 2. Последствия булимии и анорексии. 3. Формы расстройства пищеварения в полости рта. 4. Патологические процессы, затрудняющие пережевывание корма. 5. Влияние гиперсаливации на пищеварение. 6. Причины и последствия нарушения глотания. 7. Причины и последствия нарушения проходимости пищевода.
8. Типы нарушения желудочной секреции. 9. Изменения эвакуации содержимого из желудка при гиперсекреции и гиперцидитасе. 10. Механизм ускорения эвакуации содержимого из желудка в двенадцатиперстную кишку при ахилии. 11. Механизм рвоты и значение ее для организма. 12. Причины, патогенез и проявления расстройств пищеварения в преджелудках жвачных. 13. Нарушения пищеварения в кишечнике при непоступлении сока поджелудочной железы и желчи. 14. Причины и механизмы нарушения пристеночного пищеварения в кишечнике. 15. Нарушение пищеварения и всасывания в кишечнике при резком продвижении содержимого. 16. Причины и патогенез кишечной непроходимости. 17. Кишечная аутоинтоксикация.