Задание 1. Цитологический анализ гнойного экссудата.
Оснащение: предметные стекла, микроскопы; стерильные ватные тампоны; термостат; спирт-ректификат (65 мл); спирт метиловый абсолютный (65 мл); краска Романовского-Гимзы (120 мл); иммерсионное масло (6 мл); подопытные животные с гнойной раной.
Постановка опыта. Цитологическую картину воспалительного экссудата изучают при получении раневых отпечатков по М. П. Покровской и М. С. Макарову. В хирургической клинике заранее подбирают больное животное с раневой поверхностью, покрытой гнойным экссудатом.
Обычным способом, так же как и для гематологических исследований, подготавливают предметные стекла. Во время проведения лабораторных занятий хорошо вымытые и обезжиренные предметные стекла опускают в спирт (96%-ный), затем вынимают, остатки спирта поджигают. После охлаждения стекло готово к использованию для приготовления раневых отпечатков. При большом количестве гноя, покрывающего рану, его удаляют с помощью стерильных влажных ватных тампончиков. После этого поверхность стекла, отступив 1 см от узкого края, прикладывают к воспаленной ткани. Передвигая стекло, последовательно наносят несколько мазков-отпечатков. На стекле остаются тканевые клетки, клетки экссудата и микроорганизмы. При получении мазков не следует проводить стеклом по поверхности раны и тем самым предупреждать возможность повреждения клеточных элементов экссудата. Чтобы не исказить картины взаиморасположения фагоцитов и микроорганизмов, иногда располагающихся гнездами, нужно слегка прикоснуться стеклом к избранному участку раны и тотчас же отнять его в положении, строго перпендикулярном к раневой поверхности. Для полноты характеристики раневого процесса отпечатки лучше делать с разных участков очага повреждения, например от центра к периферии.
Полученные раневые мазки-отпечатки сушат, затем фиксируют в течение 5 мин метиловым спиртом (этиловым спиртом в равной смеси с этиловым эфиром в течение 15 мин). Фиксированные и высушенные в термостате или на воздухе препараты окрашивают по методу Романовского-Гимзы.
При микроскопировании окрашенных мазков-отпечатков обращают внимание на наличие нейтрофилов разной степени зрелости, микро — и макрофагов, фагоцитирующих возбудителей воспалительного процесса. Устанавливают активность фагоцитов в разных участках раны.
По цитограммам раневых отпечатков можно определить активность защитных и регенераторных реакций организма, степень бактериальной обсемененности и патогенности микроорганизмов, инфицирующих рану. Перечисленные факторы обусловливают динамику заживления ран. Обнаружение полиморфно-ядерных нейтрофильных лейкоцитов, активно фагоцитирующих возбудителей инфекционного процесса, свидетельствует о высокой активности фагоцитарной реакции. В более позднем периоде заживления раны хорошим признаком считается выявление большого числа макрофагов — моноцитарных клеток.
Оформление протокола опыта. Записывают методику приготовления мазков-отпечатков. Отмечают результаты цитологического анализа испытуемого экссудата, обсуждают их и делают выводы.
Вопросы для контроля знаний:
1. Воспаление. Определение понятия. 2. Этиологические факторы, вызывающие воспаление. 3. Внешние признаки воспаления и их характеристика. 4. Расстройства кровообращения и микроциркуляции в зоне воспаления. 5. Характеристика нарушений обмена веществ в очаге воспаления. 6. Роль биологически активных веществ в патогенезе воспаления. 7. Классификация воспалений. 8. Виды экссудата. 9. Виды гнойного воспаления. 10. Эмиграция лейкоцитов при воспалении, основные теории, объясняющие это явление. 11. Учение о фагоцитозе. Завершенный и незавершенный фагоцитоз. 12. Свойства экссудата. 13. Классификация воспалений по преобладанию альтерации, экссудации и пролиферации. 14.Воспаление как реакция целостного организма на повреждение. 15. Патогенез воспаления. Характеристика стадий альтерации, экссудации и пролиферации. 16. Исходы воспаления. 17. Биологическая роль воспаления. 18. Особенности течения воспаления у основных видов сельскохозяйственных животных (лошадей, крупного рогатого скота, свиней и птиц).