Цель занятия: Изучить свойства воспалительного экссудата.
Задание 1. Ферментативная активность гнойного экссудата.
Оснащение: штативы для пробирок; центрифуги; центрифужные пробирки; гнойный экссудат (50 мл); термостаты; рН-метры; стеклянные колбы на 5 мл; белок яйца (1,5 г); 0,1%-ный водный раствор крахмала
(120 мл); раствор Люголя (1 часть кристаллического йода, 2 части калия йодида, 17 частей воды) (8 мл); 20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты (23 мл); свежеполученная сыворотка крови подопытного животного (4 мл); водная эмульсия монобутирина (1 : 1000) (15 мл).
Постановка опыта. В пробе гноя определяют наличие протеолитических ферментов. Для проведения исследований экссудат, полученный из абсцесса, наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 мин. Для опытов используют надосадочную жидкость — сыворотку гноя.
Титр определяют по окрашиванию содержимого пробирки. При наличии нерасщепленного крахмала жидкость в пробирках окрашивается в фиолетовый цвет. При полном расщеплении крахмала ферментами гноя содержимое пробирки приобретает желтоватый цвет. Частичное расщепление крахмала выявляют по фиолетово-красному (амилодекстрин) и красному (эритродекстрин) цвету. Титр амилолитических ферментов гноя устанавливают по пробирке, содержимое которой окрашивается раствором Люголя в красный цвет.
Протеолитическую активность гноя определяют по его способности к расщеплению белка куриного яйца. С этой целью белок яйца разводят водой в 150 раз. В каждую из восьми пробирок, стоящих в штативе, наливают по 1 мл этого раствора. Затем в первую пробирку добавляют одну каплю центрифугата гноя, в последующие пять пробирок приливают гной по каплям в нарастающем количестве (от двух до шести капель). В седьмую пробирку добавляют шесть капель сыворотки крови, в восьмую — шесть капель изотонического (0,15 моль/л) раствора натрия хлорида. Этим же раствором выравнивают объемы в первых пяти пробах. Штатив с пробирками помещают в термостат на 30 мин при температуре 37 °С. По истечении этого времени штатив извлекают, во все пробирки добавляют по две капли 20%-ного (0,91 моль/л) раствора сульфосалициловой кислоты.
При полном гидролизе белка яйца протеолитическими ферментами гноя жидкость в пробирке остается прозрачной, помутнение пробы свидетельствует о наличии нерасщепленного субстрата. Таким образом, по степени помутнения раствора судят о переваривающей способности гнойного экссудата, которая условно обозначается количеством капель сыворотки гноя, полностью гидролизующих белок в испытуемой пробе за 30 мин экспозиции в термостате.
Оформление протокола опыта. Объясняют принципы выявления в гнойном экссудате протеолитических и ферментов. Записывают результаты исследований, обсуждают полученные данные. Делают выводы.