Учитывая тот факт, что при актиномикозе, как человека, так и животных, из актиномиком в опытах, проведённых в лабораторных условиях высеваются культуры вышеперечисленных возбудителей, будет уместным дать белее подробную характеристику этих микроорганизмов.
Характеристика Proactinomyces israeli (Kruse).
Синонимы: Actinomyces israeli; Streptothrix israeli Kruse, 1896; Discomyces israeli Gedoels, 1902; Streptothrix spitzi Lignieres, 1903; Actinomyces bovis Wright, 1905; Discomyces bovis Brumpt, 1906; Actinobacterium israeli Sampietro, 1908; Cohnistreptothrix israeli Pinoy, 1911; Nocardia israeli Castellani and Chalmere, 1913; Brevistreptothrix israeli Lignieres, 1924; Proactinomyces israeli Negroni, 1934; Corynebacterium israeli Radtke; Actinomyces hominis; Nocardia actinomyces Trew; Streptothrix israeli Ros. Dor.; Actinomyces israeli Lachner Sandoval, 1940. Первоначально выделен из актиномикомы человека Вольфом и Израелем [237] в 1891 г.
Считается [ ], что данный микроорганизм является возбудителем «истинного»актиномикоза человека, домашних и диких животных. Он поражает у крупного рогатого скота преимущественно кости челюсти, у свиней молочную железу, а у человека – системные органы.
A. israeli – грамположительный ветвящийся бактериоподобный микроорганизм, факультативный анаэроб (микроаэрофил), не образует спор и капсул, неподвижен. В организме больного может образовывать друзы. В тканях, пораженных актиномикозом, возбудитель чаще обнаруживается в виде друз сероватого, слегка желтоватого, беловато-серого, желтовато-серого цвета, мелких, величиной с булавочную головку, часто заметны невооруженным глазом. Размер друз колеблется от 20 — 40 до 150 — 320µ. Средний размер друз по Н. А. Ефимовой [34] равен 60 – 80 µ, а – поперечника колб, в их верхней трети – 3,0 – 3,5 µ. По данным Райта [239] друзы в актиномицетном гное оставались жизнеспособными от 18 – 22 дней. Друзы могут быть круглой или неправильной формы. Некоторые друзы состоят из нескольких колоний и вследствие петрификации могут быть твердыми. С диагностической целью достаточно их увеличение в 50 – 100 раз, но детально их можно рассмотреть при увеличении в 400 раз.
Центр друзы состоит из сплетения нитей, толщиной до 1µ, палочковидных элементов и круглых образований, окрашиваются по Граму положительно. Плазма внутри нитей мицелия и палочковидных образований довольно часто распадается на короткие фрагменты – круглые образования, которые после разрушения оболочки нитей становятся как бы самостоятельными клетками – кокками («спорами»).
По периферии гранулы некоторые нити мицелия могут иметь характерные утолщения, так называемые колбы, которые окрашиваются эозином и не окрашиваются по Граму. В некоторых друзах колбы располагаются лучеобразно, более крупные друзы при микроскопии представляют картину бесформенного нагромождения грибковых клеток. В патологическом материале утолщение нитей мицелия встречаются не всегда, а друзы иногда отсутствуют [ ].
По данным Г. О. Сутеева [59] при исследовании патологического материала от 403 лиц, больных актиномикозом, друзы были обнаружены у 265 – 63,2%, мицелий – у 38 – 9,4%, одновременно и друзы и мицелий – у 17 – 4,2%.
Хорошо развитый мицелий обычно встречается в друзах из патологического материала человека, у животных же нитчатая часть друзы, состоящая только из одних колб, слабо развита или совсем отсутствует [Мари, 44].
Обнаружение друз дает основание с большей вероятность. диагностировать актиномикоз, однако по Розебури [206,207] «получение чистой культуры A. israeli является более убедительной диагностической процедурой».
Этиология лучистых образований и колб до конца еще не выяснена. Друзы находили при актинобациллезе, туберкулезе, паратуберкулезе, стафилококкозе, бруцеллезном орхо-эпидидимите северных оленей, проказе, микозах (при мукоровом и аспергилловом), при введении в ткани подопытных животных убитых культур актиномицетов, палочек туберкулеза [ ]. Также образование эозинофильного вещества, наподобие колб, наблюдали вокруг яиц паразитирующего червя (шистозомы), личинок габронем, вокруг хламидиоспор головни в легких крупного рогатого скота при естественном заболевании, а также в легких, экспериментально зараженных ею кроликов. Аналогичное явление наблюдалось при введении в ткани кроликов частиц металлов теллурия и ванадия.
В связи с вышеперечисленным можно сделать некоторые выводы. Во-первых – друзы являются производными микроорганизмов; во – вторых – они являются защитным приспособлением макроорганизма против ряда чужеродных агентов – бактерий, грибов, червей. К. Иванов (148) рассматривает этот процесс как преципитацию белков.
В культуре A. israeli может встречаться в совершенно различных формах: в одних случаях иметь ветвление, а в других – совершенно не иметь ветвления. Это различие определяется наличием шероховатых R и гладких L – форм колоний. R – формы, выросшие на поверхности агара или в его глубине, или в бульоне, дают ветвящиеся нити. Однако необходимо отметить, что шероховатые и гладкие колонии также дают и дифтероидные бациллы с утолщениями на конце, которые складываются в Y и V элементы с намеком на ветвление.
По данным зарубежных авторов – Эриксон (111,112,113), Томсон (230) – колонии R – формы присущи анаэробным актиномицетам, выделенным от человека больного актиномикозом, а L – формы свойственны актиномицетам, выделенным от крупного рогатого скота. Главное различие таких штаммов заключается в следующем: морфологически – в более выраженном полиморфизме штаммов, выделенных от человека, в особенности в виде твердых колоний на потных питательных средах, в то время как штаммы от крупного рогатого скота более константные, мягкие, гладкие; физиологически – в большей способности штаммов, полученных от человека, ферментировать сахара; серологически – в отсутствии перекрестной реакции между типами штаммов. (Эйнсуорт и Остуик, 77)
В противоположность этому мнению Конант (95) считает штаммы человека и крупного рогатого скота идентичными. Последнее мнение очевидно более вероятно, ибо Томпсон (230), а также Эриксон (113) выделяли штаммы A. israeli, как от крупного рогатого скота, так и от свиней. Кроме того, Эриксону (113) приходилось наблюдать переход типичного «шероховатого» штамма A. israeli, выделенного от человека, в «гладкий» мягкий штамм, типа A. bovis.
Биохимические свойства. A. israeli продуцирует кислоту без газа в широком ряду углеводов (112,143,168,189,221). Практически все штаммы A. israeli, выделенные как из очагов, так и из ротовой полости, в одинаковой мере хорошо ферментируют глюкозу, лактозу, галактозу, салицин, мальтозу, декстрин, иновит и не ферментируют инулин, маннит и дульцит. По данным Неслунда (187,188) некоторые штаммы обладают протеолитическим действием, большинство авторов приходят к выводу, что A. israeli лишен этих свойств (112,168,172,189).
Линьер (168) считает, что A. israeli не образует индола, тогда как Негрони (189) нашел, утверждает, что индол образуется в незначительных количествах. Согласно данным этих исследователей A. israeli образует сероводород в глюкозном агаре, содержащем печеночный экстракт, гемолизует эритроциты человека, но не цельную кровь и кровь кроликов. Большинство же исследователей отрицают наличие гемолитических свойств у A. israeli. Пигменты или антимикробные субстанции, подобные тем, которые получают из непатогенных актиномицетов у этого микроорганизма не были получены (234).
Серологические свойства. Эриксон (1130 нашел отличие между штаммами, выделенными от человека и штаммами – от крупного рогатого скота. Ирлиер (107), Магнуссон (173) различают три серологических типа A. bovis: тип А характерный для крупного рогатого скота, тип В и С, характерный для свиней.
Слак (216,217) в результате изучения агглютинационных свойств штаммов анаэробных актиномицетов, выделенных от больных актиномикозом: человек – 11 штаммов; крупный рогатый скот – 5 штаммов; лошадей – 2 штамма; свиней – 1 штамм, а также из тонзилярных крипт человека, пришел к выводу, что они микроскопические родственники. Им было отмечено наличие агглютинационных связей в титре с антигеннами, приготовленными из штаммов Nocardia, Corynebacterium, Lactobacillus и отсутствием таковых у Streptomyces griseus.
Позднее в 1955 г. Слак (218), изучая 20 штаммов анаэробных актиномицетов, выделенных от человека и крупного рогатого скота, разделил их на две серологические группы: А и В – для животных и человека.
Химические свойства. Изучая химическую структуру 4-х штаммов A. israeli Квапинский (162) нашел, что они состоят, в основном, из жировой, нуклеиновой и полисахаридной фракций. Фракция жиров содержит 0,22 – 0,4% фосфора, стеариновую, пальмитиновую и олеиновую кислоты. В нуклеиновой фракции имеется 74,3 – 88,0% протеина, 0,87 – 2,0% дезоксирибонуклеиновой кислоты, 1,3 – 2,25% пентозы и 14 различных аминокислот. Полисахаридная фракция состоит состоит из 47 – 925 глюкозы. Автор отмечает, что A. israeli не содержит фенилаланина, но эта аминокислота была обнаружена у различных микроорганизмов, включая микобактерий, коринебактерий, стрептококков и актиномицетов.
Культивирование. A. israeli — — анаэроб, микроаэрофил, лучше растет при 37 оС и не растет при 22 оС. Оптимальная рН среды от 7,2 до 7,6 (42,55,92,186).Выращивание удается на ряде питательных сред, из которых наиболее приемлемы: яичная или глицерин-яичная среда (112), среда Любинского (189), сердечно-мозговой настой, к которому добавляется 2% агара (207), тиогликолевая среда Бруэрса (86), обычный мясопептонный агар с 1% глюкозой, глицериновый, печеночный, картофельный, кровяной и сывороточный агары (42,55,58). Также описан метод культивирования A. israeli в диализированной жидкой среде при свободном доступе кислорода.
Устойчивость. A. israeli легко погибает при умеренном нагревании: за 1 час при 60° (92) или за 30 минут при 60 — 65° (189). Культуры в вакууме и холодильнике остаются жизнеспособными 3 – 4 месяца. Свежевыделенные штаммы на агаре в пробирках, содержащиеся в холодильнике, должны пересеваться через 2 недели, в то время как некоторые штаммы сохраняются при этих условиях до месяца.
Методы выделения. Для выделения A. israeli из актиномикозного материала большинство исследователей вносят друзы в толщу столбика высотой до 10 см, расплавленного, а затем охлажденного до 45 — 50° глюкозного агара. После застывания агара в пробирку добавляется слой стерильного вазелинового масла высотой 1,0 – 1,5 см. Посевы выдерживаются при температуре 37°. Рекомендуется перед посевом производить отмывку друз стерильным физиологическим раствором в чашках Петри или пробирках. Кроме того, Н. А. Ефимова (34) отмытые друзы подвергает ультрафиолетовому облучению в течение 1 – 1,5 минуты.
Розебури (207) получил хороший результат, используя для выделения культуры 2% сердечно-мозговой агар в чашках Петри и в атмосфере с 5% углекислым газом в анаэробных условиях. Выросшие колонии анаэробного актиномицета затем пересивались на 1% агар с 1% глюкозой.
Большинство исследователей вносят в агар не раздавленными, тогда как некоторые (207) рекомендуют раздавливать друзы перед посевом о внутренний край пробирки.
Культуры анаэробного актиномицета во всех случаях посева развивается медленно, ее рост наблюдается не ранее, чем через 4 – 7 суток, также существуют данные, что рост происходит через 10 – 45 сутки (207,42).
Получение культуры A. israeli сопряжено со значительными трудностями, потому что рост наблюдается далеко не всегда. В отношении характерен пример Бонстрема (87), который, производя однажды более 700 посевов (из патологического материала при челюстной форме актиномикоза крупного рогатого скота), получил рост только в 12 пробирках.
По данным Сутеева (59) при исследовании 403 случаев актиномикоза человека, культуры анаэробных и аэробных актиномицетов были выделены в 186 случаях – 46,15. Из них анаэробные культуры были получены только в 53 случаях – 28,6%, аэробные – в 105 – 56,7%, одновременно анаэробные и аэробные – в 28 – 15,0%. Из 105 аэробных культур выделено 37 лизирующихся и 68 нелизирующихся форм аэробных актиномицетов. Поэтому выделение культуры исследователи рекомендуют проводить на возможно большем количестве пробирок.