Цель занятия. Научиться правильно отбирать патматериал для гистологического исследования.
Содержание. Гистологическое исследование является важным, а иногда решающим в постановке диагноза. Его проводят в тех случаях, когда на основании эпизоотической ситуации, клинических признаков, картины вскрытия, бактериологического и других исследований установить диагноз невозможно.
Патматериал берут из разных мест подлежащих исследованию органов и тканей от свежих трупов или только что убитых животных в чистую, сухую стеклянную или реже глиняную посуду.
Площадь кусочков органов и тканей, отбираемых для гистоисследования, не должна превышать 1-2 см2, толщина — 1 см. Из каждого органа берут 3-4 кусочка, мелкие органы берут полностью. При наличии видимых невооружённым глазом изменений в органах или тканях кусочки вырезают на границе так, чтобы в них попали измененные и неизмененные участки. Обязательно’ надо взять кусочки органа с капсулой. Головной мозг можно брать полностью (целиком) или вырезать кусочки с учетом особенностей заболевания центральной нервной системы. Почки, надпочечники, яичники надо брать так, чтобы попали корковый и мозговой слои.
Отобранный патматериал сразу же помешают в фиксирующую жидкость, количество которой должно быть в 10-15 раз больше, чем патматериала. На дно банки предварительно помещают слой ваты для равномерного пропитывания патматериала. Если патматериал в день взятия не отправлен в лабораторию, то через 24 часа фиксирующую жидкость сменяют. Смену фиксирующей жидкости осуществляют необходимое число раз до завершения процесса фиксации, о чём судят следующим образом. Один из кусочков разрезают поперёк, если при этом вся поверхность разреза окажется равномерного серо-белого цвета, то фиксация завершена, если центр кусочка имеет розовый цвет, то смену жидкости продолжают с суточным интервалом необходимое число раз. Следует помнить, что при фиксации в формалиновом растворе патматериал хранят в темном месте или в темной посуде.
Для гистоисследования можно направить целые трупы, органы или. их части в нефиксированном виде. В таком случае должна быть обеспечена быстрая доставка их в лабораторию.
Фиксирующие жидкости
1. Раствор формалина 10%-ной концентрации. Это наиболее распространенная, недорогая и универсальная фиксирующая жидкость. Раствор готовят на водопроводной или колодезной воде. Для приготовления 1 литра раствора берут 100 мл 40%-ного — формалина и 900 мл воды.
Лучше, пользоваться нейтральным формалином. Способ его приготовления: к 1 л продажного формалина добавляют 100-200 г молотого мела или углекислой магнезии. Полученный раствор в течение первого дня несколько раз перемешивают. Затем дают отстояться, после чего формалин готов для приготовления нейтрального раствора.
2. Ацетон или спирт с эфиром поровну. Эти вещества применяют для фиксации материала при необходимости исследования на бешенство. Формалиновая фиксация для этой цели непригодна.
3.Спирт-ректификат 96°-ный является универсальной фиксирующей жидкостью, которую можно применять во всех случаях. С целью экономии спирта кусочки патматериала берут размером 5x5x5 мм.
Во избежание промерзания материала при перевозке в зимнее время его необходимо хорошо профиксировать на месте, затем переложить в жидкость для транспортировки: 30-50%-ный раствор глицерина, приготовленный на 10%-ном растворе формальна или 70°-ного спирта.
Профиксированныи на месте патматериал можно пересылать в емкости меньшего размера. Фиксирующую жидкость и патматериал в таком случае можно брать в соотношении 1:3-5, а не 1:10-15, как это требуется для фиксации свежего патматериала. Правила упаковки и пересылки патматериала для
Гистологического исследования
Патматериал для гистоисследования можно направлять по почте и нарочным. В свежем (нефиксированном) виде патматериал направлять только с нарочным. В том и другом случае патматериал надо обязательно тщательно упаковывать, лучше в стеклянную посуду или в полиэтиленовую пленку (но не в мешочек, который может разорваться по шву). Затем уложить в деревянный или металлический ящик, приняв при этом все меры предосторожности против разрыва пленки и рассеивания возбудителей болезней во внешней среде. Упаковка должна гарантировать доставку патматериала в целости. На верхней стороне ящика делает— надпись: «Осторожно — стекло», «Верх».
При отсутствии полиэтиленовой пленки материал можно упаковывать в клеенку, брезент, холст, мешковину, смоченные креолином, лизолом или другим дезинфицирующим раствором.
При пересылке фиксированного или консервированного патматериала емкость герметически закрывают пробкой (стеклянной, резиновой, пробковой или деревянной). Пробку закрепляют тонкой проволокой или шпагатом и заливают сургучом или смолой, воском, парафином, менделеевской замазкой. На банки с кусочками органов и тканей наклеивают этикетки с указанием номера иго: клички животного, внутрь банки кладут этикетку из ватмана или картона, полотна с написанным тушью или простым (не химическим) карандашом номером животного.
В банку лучше брать патматериал от одного животного. Если берут от нескольких животных в одну банку, то кусочки от каждого животного с этикеткой (номером) завязывают в кусочки марли. Банки устанавливают в ящик и плотно обкладывают их ваток или паклей, бумагой, опилками, стружками, соломой, чтобы они не разбились при транспортировке. Ящик закрывают и опечатывают.
Профиксированный на месте патматериал для пересылки можно пересылать в лабораторию без использования посуды. Для этого его следует обложить ватой, смоченной фиксирующей жидкостью, тщательно завернуть в клеенку, а затем упаковать в ящик.
Если надо пересылать целые органы или их куски толщиной более 3 см, то для лучшего проникновения фиксирующей жидкости следует сделать на органах разрезы и вложить туда вату.
Кости упаковывают в полиэтиленовую пленку или целлофан, клеенку, марлю, ткань, смоченные в каком-либо дезинфицирующем растворе.
При пересылке нефиксированного патматериала от животных, болевших особо опасными болезнями (сибирская язва, бешенство, шумящий карбункул, бруцеллез, чума, инфекционная анемия, туляремия, ящур) должна соблюдаться особая осторожность. Такой патматериал помещают э герметически закрываемую емкость. Крышку укрепляют, заливают сургучом или другим веществом. Емкость устанавливают в металлический ящик (коробку), который необходимо запаять, опломбировать или опечатать, а затем металлический ящик поместить в деревянный и сделать надпись: «Осторожно — стекло», «Верх». Если такой материал отправляют с нарочным, то герметически закрытые банки можно тщательно упаковывать в деревянный ящик без металлической коробки.
К посылаемому патматериалу прилагают сопроводительный документ на упаковку материала и протокол вскрытия трупа или осмотра убитого животного.
В сопроводительной на упаковку указывают, какой патматериал направлен, сколько, в какой посуде, какая фиксирующая жидкость использована, род упаковки. Один экземпляр сопроводительной отправляют запечатанным в конверт вместе с патматериалом, а второй остается у отправителя. В случае обнаружения в лаборатории или на кафедра несоответствия упаковки, количества патматериала с данными сопроводительного документа или обнаружения порчи патматериала составляется акт. Копия такого акта отсылается отправителю патматериала.
Примерная форма сопроводительного документа к патматериалу направленному для гистоисследования
Сопроводительная
В______________________________________________________________________________
(указать куда направляется патматериал, адрес)
При этом направляем для гистологического исследования патматериал
_______________________________________________________________________________
(какой, сколько, из каких органов)
_______________________________________________________________________________
От______________________________________________________________________________
(вид животного, кличка, инвентарный номер)
Принадлежащего (ей) _____________________________________________________________
(название хозяйства, отделения, фермы или Ф. И.О. владельца животного и его адрес)
Дата заболевания животного (число, месяц, год)
____________________________________________
Дата падежа или убоя животного (число, месяц, год)
_____________________________________________
Предположительный диагноз или предположительная причина гибели
______________________________________________________________________________
Род упаковки патматериала (какие ёмкости, сколько, чем укреплены и залиты пробки или крышки, какая тара)
______________________________________________________________________________
Фиксирующая жидкость (название и концентрация)
____________________________________________
На какое заболевание требуется провести гистоисследование
_______________________________________________________________________________
Дата отправки патматериала (число, месяц, год)
_________________________________________
Кто направил патматериал (Ф. И.О., должность, адрес отправителя)
__________________________________________________________
Подпись_____________
Примерная схема краткого протокола вскрытия трупа или осмотра убитого животного
Краткий протокол №___________
Мы,_______________________________________________________________________нижеподписавшеся (Ф. И.О., должность, место работы вскрывавшего труп и присутствующие при этом)
Произвели вскрытие трупа (осмотр убитого(ой)_______________________________________
________________________________________________________________________________
(число, месяц, год)
________________________________________________________________________________
(область, район, село, хозяйство, отделение)
Вид животного, кличка, порода, возраст, инвентарный номер___________________________
________________________________________________________________________________
Принадлежащего(ей)______________________________________________________________
(название и адрес организации или Ф. И.О. и адрес владельца).
Данное животное заболело(число, месяц, год)________________________________________
Пало или убито(число, месяц, год)__________________________________________________
Клинические признаки и продолжительность болезни (если вскрывающий не наблюдал клинические признаки, то должен выписать их из истории болезни или со слов ухаживающего персонала, владельца)_____________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Производилось ли лечение и его эффективность. Когда и какие проводились предохранительные прививки. Применялись ли антибиотики лечебные, кормовые____________________
________________________________________________________________________________
Прижизненный диагноз, результаты лабораторного исследования у данного животного _____
________________________________________________________________________________
Далее указывается количество животных в хозяйстве по видам, состояние кормления и содержания, ухода, эксплуатации, эпизоотологического состояния хозяйства, района в настоящее время и прошлом: когда и какие были эпизоотии, кокой был отход животных данного вида, когда началось данное заболевание, какие животные и в каком возрасте преимущественно болеют и погибают. Приводят цифровые данные о ходе заболевания по дням: с павших, вынужденно убитых и больных.
Патологоанатомическая картина
Описывают все измененные органы и ткани, указывают при этом их форму, вес, размер (длину, ширину, толщину а сантиметрах), состояние краев (острые, притуплены, тупые), оболочки (гладкие, блестящие, бугристые, шероховатые, сморщенные, тусклые), цвет с поверхности и на разрезе, состояние стенок сосудов, кишечника, желудка и других полостных органов; на разрезе (сухой или сочный, выраженность рисунка, соскоб — слабый, умеренный или обильный) и т. д.
При наличии в органах и тканях кровоизлияний, некрозов, участков дистрофии, абсцессов и т. п. указывают их количество, локализацию, размер и форму, на какую глубину они проникают, выраженность краев (четкие, нечеткие); консистенцию органон (твердая, плотная, упругая, эластичная, тестообразная, дряблая), рисунок ткани в очаге поражения.
Неизмененные органы не описывают, а указывают: «В остальных органах макроскопических изменений не установлено» или «Остальные органы в пределах нормы».
Подписи:______________________
Правила изготовления влажных патологоанатомических музейных препаратов.
Материал надо брать от свежих трупов или недавно убитых животных. Органы, ткани или их части берут с наиболее выраженными изменениями. Материал нельзя загрязнять содержимым желудочно-кишечного тракта, кровью и т. п., в случае загрязнения его надо тщательно обтереть чистым тампоном. Обмывать водой не рекомендуется.
Если орган крупных размеров, то для быстрейшего проникновения фиксирующей жидкости вовнутрь (органа или ткани) можно сделать надрезы на его тыльной стороне, не представляющей интереса для демонстрации. В случае необходимости здесь же делают небольшое окошечко, через которое острой ложкой можно выскоблить часть ткани. Образовавшуюся пустоту заполняют ватой и помещают орган в фиксирующую жидкость. Можно также фиксирующую жидкость вводить вглубь органа или ткани в разные места при помощи шприца и длинной иглы или через естественные ходы — сосуды, бронхи, молочные каналы и т. д.
Если интерес представляет одна из сторон органа, можно сделать пластинчатый препарат с толщиной среза 3-4 см.
Фиксирующей жидкости должно быть в 10 раз больше, чем патматериала.
Полостные органы — мочевой и желчный пузыри, матку, кишечник и другие после удаления содержимого заполняют гигроскопической ватой, смоченной той же фиксирующей жидкостью.
Для демонстрации слизистой оболочки орган выворачивают, заполняют ватой, смоченной фиксирующей жидкостью. Такие органы можно разрезать по длине, затем прикрепить к дощечке или фанере, картону, стеклу при помощи ниток или булавок и после этого поместить в фиксирующую жидкость.
Для сохранения формы какого-либо полого органа, его полости заполняют ватой или марлей или вставляют распорки. После уплотнения и фиксации органа или трупа материалы, применяемые для придания формы, удаляют.
При изготовлении музейных препаратов с сохранением окраски (кровоизлияния, участки гиперемии, дистрофии, некрозы или натурального цвета органа) применяют различные методики.
Метод Мельникова-Разведенкова
Жидкость для фиксации:
Вода водопроводная 1000мл
Хлорид калия 5г
Ацетат калия или натрия 30г
Формалин продажный 100мл
Жидкость для восстановления цвета:
Спирт ректификат 85-90-градусный
Жидкость для хранения препарата:
Вода водопроводная прокипяченная 1000мл
Ацетат калия или натрия 400г
Глицерин 600мл
Метод Кайзерлинга
Жидкость для фиксации:
Вода водопроводная 1000мл
Ацетат калия 30г
Азотнокислый калий 15г
Формалин продажный 200мл
Жидкость для восстановления цвета:
Спирт ректификат 90-градусный
Жидкость для хранения препарата:
Вода водопроводная 900мл
Ацетат калия 200г
Глицерин 300мл
Метод Пика
Жидкость для фиксации:
Вода дистиллированная 1000мл
Карловарская соль 50г
Формалин продажный 600мл
Жидкость для восстановления цвета:
Спирт ректификат 80-85 градусов
Жидкость для хранения препарата:
Вода дистиллированная 1000мл
Ацетат калия или натрия 300г
Глицерин 600мг
Метод Иоресса
Жидкость для фиксации и сохранения цвета:
Вода водопроводная 1000мл
Карловарская соль 50г
Насыщенный раствор хлоралгидрата на дистиллированной воде 50мл
Формалин продажный 50-100 мл
Жидкость для хранения препарата:
Вода водопроводная 1000мл
Ацетат калия или натрия 300г
Глицерин 600мл
Можно вместо третьей жидкости Мельникова-Разведенкова и второй жидкости Иоресса применять для хранения препарата жидкость Тизенгаузена:
Вода водопроводная 1000 мл
Хлорид натрия 200 г
Калийная селитра 10 г
В эту жидкость желательно добавлять немного камфары кристаллической или тимола.
Время фиксации в жидкости зависит от размера органа. Продолжительность фиксации кишечника, мочевого пузыря, оболочек мозга (если они не утолщены) в пределах одних суток. Более крупные органы требуют большего времени для фиксации — 3-5 и более суток.
Орган считается профилированным в том случае, если он на всю глубину имеет одинаковый сероватый цвет (как и на поверхности) и при надавливании из разреза не вытекает красноватая жидкость.
После того, как орган профилируется, его переносят по методу Иоресса в жидкость для хранения, а по методу Мельникова-Разведенкова, Кайзерлинга, Пика — в спирт для восстановления первоначального цвета.
Время восстановления цвета органа в спирте — определяется опытным путем (от 20 минут до нескольких часов) и зависит от продолжительности фиксации. Сразу после восстановления первоначального цвета орган перекосят в жидкость для хранения.
Если требуется восстановить цвет крупного органа, то с целью экономии спирта его помещают в кювету и покрывают тонким слоем гигроскопичной ваты, смоченной спиртом. Вату периодически приподнимают, определяя момент восстановления первоначального цвета.
После восстановления естественного цвета орган или ткань помещают в банку с жидкостью для хранения. Банку герметически закрывают. Крышку вырезают из обычного или органического стекла и приклеивают замазкой Менделеева-Шора, клеем БФ-2, БФ-4 или др. Замазка Менделеева продается в зооветснабах и аптеках в готовом виде. Ее можно готовить и самостоятельно. Для этого в металлической посуде расплавляется 125 г желтого пчелиного воска. Затем небольшими порциями добавляется 500 г канифоли, 200 г краски-мумии прокаленной и 3-5 мл льняного или другого масла при постоянном помешивании. После этого вся масса варится на слабом огне при легком помешивании до исчезновения пены. Готовая замазка должна быть одинаковой по окраске У Густоте. Она переливается в металлическую посуду, в которой хранится и разогревается при необходимости ее использования.
Состав замазки Шора (г): гуттаперчи — 100, смолы черной — 200, асфальта — 200, сала несоленого — 200, канифоли — 400. В случае получения очень сухой консистенции надо уменьшить количество канифоли.
Для запечатывания банок лучше пользоваться замазкой Менделеева. Она влагоустойчива и хорошо удерживает крышку, которую при необходимости можно снять, что легко сделать горячим ножом или скальпелем.
Перед закрыванием просушивают края банки, разогревают замазку, в нее быстро погружают края крышки, удерживая её наклонно. Затем крышку быстро накладывают на банку, слегка прижимают и сверху кладут небольшой груз. После прикрепления крышки проверяют герметичность, для чего банку осторожно наклоняют на бок и проверяют не подтекает ли жидкость.
Если сохранение естественной окраски органа или ткани не обязательно, то их можно хранить в 10%-ном растворе формалина.
Этикетка к патологоанатомическому музейному препарату (примерный образец) ЭТИКЕТКА
Орган_____________________________________________________________________
(название, вид, возраст животного)
Диагноз___________________________________________________________________
(указать, какой патологический процесс, какое заболевание)
Кто изготовил препарат______________________________________________________
( фамилия, имя, отчество, курс, группа)
(отделение — очное, заочное)
Дата изготовления_____________(число, месяц, год)
Подпись______________
Занятие №4
Тема: Смерть, посмертные изменения. Некроз. Гангрена.
Препарат №1. Смешанные посмертные сгустки крови в сердце.
Макрокартина. Сердце на разрезе. Правая и левая половины сердца заполнены блестящими, эластичной консистенции сгустками крови темно-красного и серо-белого цвета с гладкой поверхностью, легко извлекающимися из полостей сердца.
Микрокартина. Темно-красная часть сгустка состоит из эритроцитов, лейкоцитов и нитей фибрина, серо-белая — из нитей фибрина и лейкоцитов.
Наличие во всех сердечных полостях смешанных сгустков крови свидетельствует о том, что агония была длительной смерть наступила в результате остановки сердца.
Заключение. Посмертное изменение — смешанные сгустки крови а сердце.
Дифференциальная диагностика. От прижизненных тромбов
Препарат №2. Сухие некрозы в печени.
Макрокартина. С поверхности. Правая доля печени клиновидной формы, размером 11x10x3,5 см, края притуплены, капсула умеренно напряжена. Цвет печени темно-коричневый, неравномерный с наличием серо-желтых участков различной формы, размером от 0,1 до 2 см с четкими, извилистыми краями, уплотненной консистенции.
На разрезе. Поверхность разреза органа сухая, ровная; цвет поверхности темно-коричневый с наличием участков серо-желтого цвета различной формы размером от 0,1 до 2 см с четкими извилистыми краями, с сухой поверхностью, стертым рисунком.
Микрокартина. Серо-желтые участки — это бесструктурная масса, состоящая из окрашенной цитоплазмы и хроматина ядер, образовавшихся в результате пикноза и рексиса.
Патологоанатомический диагноз. Сухие ареактивные некрозы печени.
Этиология. Недостаток или прекращение кровоснабжения (тромбоз, эмболия, спазм сосудов, сдавливание опухолью, конкрементами, закупорка паразитами, воспаление}; нарушение центральной или периферической нервной системы, инфекции, интоксикация, лучевая радиация и др.
Дифференциальная диагностика. От зернистой и жировой дистрофии, абсцессов, паразитарных узелков, гранулематозного пролиферативного воспаления, туберкулезных узелков, опухолей.
Препарат №3. Инкапсулированные некрозы в печени.
Макрокартина. С поверхности. Поперечно срезанный фрагмент печени свиньи треугольной формы, размером 12×5,5×3,5 см; капсула напряжена, поверхность бугристая. Цвет печени неравномерный, серо-коричневый, с наличием участков округлой формы, размером от 0,3 до_ 2 см в диаметре, серо-белого цвета, выступающих над поверхностью органа, уплотненной консистенции.
33
На разрезе. Поверхность разреза органа сухая, рисунок стерт; цвет серо-коричневый с наличием участков овальной формы, размером от 0,3 до 2 см в диаметре с четкими, ровными краями, серо-белого цвета, крошковатой консистенции, со стертым рисунком. Вокруг отдельных очагов располагается серая, плотная, волокнистая ткань — соединительнотканная капсула. В центре некоторых очагов видны крупинки белого цвета, твердой консистенции — известь.
Микрокартина. Серо-белые участки представляют собой безъядерную, бесструктурную массу с глыбками хроматина, ограниченную от основной части органа соединительнотканной капсулой.
Патологоанатомический диагноз. 1.Инкапсулированные сухие некрозы печени. 2.Зернистая дистрофия печени.
Этиология. Недостаток или прекращение кровоснабжения (тромбоз, эмболия, воспаление, спазм сосудов, сдавливание опухолью или конкрементами, паразитами), нарушение центральной или периферической нервной системы, инфекции, интоксикации, лучевая радиация.
Дифференциальная диагностика. От зернистой и жировой дистрофии, абсцессов, паразитарных узелков, гранулематозного пролиферативного воспаления, туберкулезных узелков, опухолей.
Препарат №4. Секвестр в легком.
Макрокартина. С поверхности. Некротический участок легкого, овальной формы размером 14x8x4 см, серо-белого цвета, уплотненной консистенции.
На разрезе. Вокруг этого участка видна мощная соединительнотканная капсула; по периферии — омертвевшая ткань, местами подвергшаяся гнойному расплавлению, отслоилась от окружающей капсулы. Между некротическим участком и капсулой находится жидкость.
Микрокартина. Некротический участок представляет собой бесструктурную массу с большим количеством глыбок хроматина кариорексис, кариопикноз). По периферии некротического участка располагается зона из нейтрофильных лейкоцитов, со стороны сохранившейся легочной ткани — мощная соединительнотканная капсула, между ними находится экссудат.
Патологоанатомический диагноз.. Секвестр в легком.
Этиология: Инфекционные, инвазионные заболевания, интоксикации, расстройства кровообращения, заболевания нервной системы, аллергия.
Дифференциальная диагностика. От опухолей, инкапсулированных некрозов.
Препарат №5. Сухая гангрена кожи и проксимального конца плюсневой кости.
Макрокартина. С поверхности. Скакательный сустав жеребенка гнедой масти покрыт кожей и шерстью. 1/3 часть плюсневой кости глубиной на 2-4 мм, 1/3 костного мозга и края кожи по всей окружности конечности неровные, шероховатые, тусклые, твердые, сухие, от темно-коричневого до черного цвета.
Остаток сохранившейся плюсневой кости имеет шероховатую поверхность с округлым 3×2,5×0,5 см углублением. Дно углубления пористое, шероховатое, желто-белого цвета.
Поверхность отпила большеберцовой кости ровная, желто-белого цвета, сухая.
Микрокартина. Ядра и цитоплазма клеток кожи и кости в этом участке в состоянии пикноза и рексиса (сухой некроз).
Патологоанатомический диагноз. Сухая гангрена кожи и проксимального конца плюсневой кости. Мутиляция нижнего отдела конечности.
Этиология. Недостаток или прекращение кровоснабжения при тромбозе, эмболии, опухолях, воспалении, спазмах; нарушение центральной или периферической нервной системы; инфекционных заболеваниях (например, некробактериоз, лептоспироз), лучевая радиация, ожоги, отморожение, отравление спорыньей, пролежни.
Дифференциальная диагностика. От травм, ожогов, пролежней.
Препарат №6. Мумификация плода (сухая гангрена).
Макрокартина. Плод крупного рогатого скота 19x9x9 см в плодных оболочках в возрасте 4,5-5 месяцев; твердый, сухой консистенции, темно-коричневого цвета. На наружной плодной оболочке (хорионе) видны котиледоны (участки скопления ворсинок). Микрокартина. Клетки всех органов и тканей уменьшены в размерах, но с сохранившейся структурой.
Патологоанатомический диагноз. Мумификация плода (сухая гангрена) .
Этиология и патогенез. После воздействия патогенного фактора (бруцеллез, хламидиоз, микотоксикоз, травма и др. } наступил аборт — прерывание развития плода, но в силу низкой сократительной способности матки плод изгнан не был и задержался в ней на длительное время. При наличии слизистой пробки беременности в шейке матки, стерильных условий и высокой всасывающей способности стенки матки погибший плод мумифицировался (сухая гангрена) и остался в полости матки.
Дифференциальная диагностика. От новообразований