Организация экспериментов с лабораторными животными

Экспериментальная часть работы выполнена на 778 белых беспородных крысах-самцах массой 180-250 г, полученных из питомника научно-исследовательского института биологии Харьковского национального университета им. В. Н. Каразина в течение 2005-2006 годов.

Выбор крыс в качестве объекта исследования обусловлен тем, что они обладают повышенной чувствительностью к действию ЭМИ различных диапазонов (Темурьянц, 1989; Грабовская, 1992; Чуян, 1992) и являются удобным экспериментальным материалом при проведении исследований. Для эксперимента отбирали животных одинакового возраста, характеризующихся одинаковой двигательной активностью в тесте «открытого поля». Подобный отбор позволил сформировать однородные группы животных с одинаковыми конституциональными особенностями, однотипно реагирующих на действие различных факторов.

Было проведено пятнадцать серий экспериментов (табл. 3.1). Суммарные данные, характеризующие объем проведенных исследований, представлены в таблице 3.2.

В первых четырех сериях экспериментальных исследований по изучению антиноцицептивного эффекта однократного и курсового действия низкоинтенсивного ЭМИ КВЧ при экспериментально вызванном болевом стрессе использовали несколько моделей болевых реакций. Это связано с тем, что регуляция болевой чувствительности обеспечивается интегративным комплексом механизмов, имеющих избирательную, динамически изменяющуюся нейрохимическую и нейроморфологическую структуру, которая определяется видом действующего фактора (Калюжный, 1987; Михайлович и др., 1990; Брагин, 1991).


Таблица 3.1.

Организация экспериментов с лабораторными животнымиПродолжение таблицы 3.1.Таблица 3.2.

Объем проведенных исследований (количество крыс, использованных в экспериментах)

Серии экспериментальных исследований Модели болевых тестов Всего
«ФормалиновыйТест» «Уксусный тест» Тест «горячая пластинка» Тест электростимуляции
I. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при тонической боли 135 135
II. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при висцеральной боли 75 75
III. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при острой термической боли 50 50
IV. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при острой боли путем электрораздражения 50 50
V. Сравнительное исследование аналгетического эффекта ЭМИ КВЧ и анальгина 40 40
VI. Зависимость антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ от индивидуальных особенностей животных 30 30
VII. Зависимость антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ от локализации воздействия 40 40
VIII. Зависимость антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ от экспозиции воздействия и от наличия поляризации ЭМИ 50 50
IX. Влияние ЭМИ КВЧ на циркадианную ритмику болевой реакции у крыс 64 64 128
X. Влияние ЭМИ КВЧ на инфрадианную ритмику болевой чувствительности у крыс 10 10
XI. Исследование роли системы опиодных пептидов в механизмах антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ 20 20 20 60
XII. Исследование роли серотонина в механизмах антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ 20 20
XIII. Исследование роли норадреналинергической системы в механизмах антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ 30 30
XIV. Исследование роли дофаминергической системы в механизмах антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ 20 20
XV. Исследование роли мелатонина в механизмах антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ 20 20
ИТОГО 469 95 134 60 758

Так, в первой серии экспериментальных исследований по изучению антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ при экспериментально вызванной тонической боли применяли «формалиновый тест» (ФТ) (Oyama et al., 1996; Dubuisson et al., 1997). Вторая серия экспериментов была посвящена изучению антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ при экспериментальной висцеральной боли в «уксусном тесте» (УТ) (Koster, 1959). В третьей серии экспериментов моделировали острую термическую боли в тесте «горячая пластинка» (ТГП) (O’Callaghan, 1979) в течение 9-ти суток. В четвертой серии исследований использовали тест электростимуляции (отдергивания лап) (ТЭС) для моделирования острой боли путем электрического болевого раздражения.

Целью пятой серии экспериментов явилось сравнительное исследование обезболивающего действия ЭМИ КВЧ при тонической боли на модели «формалинового теста» и широко распространенного анальгетика – анальгина в различных дозах.

Первые пять серий экспериментов проводились на животных со средним уровнем двигательной активности (СДА) и низкой эмоциональностью, определенными в тесте ОП, которые согласно нашим (Чуян, 1992) и литературным данным (Сантана-Вега, 1991; Грабовская, 1992) преобладают в популяции. Поэтому можно утверждать, что у них развивается наиболее типичная реакция на экспериментальные воздействия.

В шестой серии экспериментов по изучению зависимости антиноцицептивного эффекта низкоинтенсивного ЭМИ КВЧ от индивидуально-типологических особенностей животных отбирали крыс с низким (НДА), средним (СДА) и высоким (ВДА) уровнями двигательной активности и низкой эмоциональностью, а также с разным профилем моторной асимметрии («правши», «левши» и «амбидекстры»), которые определялись в тестах «открытого поля» и Т-образного лабиринта. Экспериментальных животных подвергали воздействию болевого стресса в «формалиновом тесте».

Последующие серии экспериментов проводились на животных со СДА.

Седьмая серия экспериментов была посвящена выявлению зависимости антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ от локализации КВЧ-воздействия у животных со СДА при экспериментально вызванной тонической боли при инъекции формалина в левую или правую заднюю стопу (локализация КВЧ-воздействия – затылочно-зоротниковая область, области правой или левой точек акупунктуры).

В восьмой серии экспериментов исследовалась зависимость аналгетического действия ЭМИ КВЧ от экспозиции воздействия и наличия или отсутствия поляризации ЭМИ при экспериментально вызванной тонической боли в «формалиновом тесте».

Девятая серия экспериментов была посвящена изучению влияния низкоинтенсивного ЭМИ КВЧ на изменение циркадианной ритмики болевых реакций при экспериментальных тонической и острой термической боли. Тестирование проводилось через каждые три часа восемь раз в течение одних суток.

Оценку влияния низкоинтенсивного ЭМИ КВЧ на изменение инфрадианной ритмики болевой чувствительности у крыс проводили в десятой серии исследования в тесте электростимуляции с помощью определения болевого порога ежедневно с 800 до 1100 часов в течение 40 суток эксперимента. Кроме того был проведен сравнительный анализ динамики болевого порога (в вольтах) у крыс, подвергнутых изолированному и комбинированному с воздействием низкоинтенсивного ЭМИ КВЧ действию болевого фактора в тесте электростимуляции со значениями Ар-индекса геомагнитной активности (ГМА) и индексом «числа Вольфа» солнечной активности (СА). Данные были получены на сайте Ftp://ftp. ngdc. noaa. gov/stp.

Для изучения механизмов антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ были проведены 11 – 15-ая серии экспериментов, в которых изучали влияние эндогенных ОпП, СТ, НА, ДА и МТ на аналгетическую эффективность изучаемого физического фактора.

В каждой серии экспериментов присутствовала контрольная группа животных, которую подвергали мнимому воздействию ЭМИ КВЧ («плацебо») той же локализации и продолжительности, однако генераторы были отключены от сети питания.

В описанных тестах животные использовались однократно, после чего выбывали из эксперимента (за исключением 11-ой серии экспериментов, в которой животные в течение 40 суток ежедневно подвергались воздействию острой боли в тесте электростимуляции, являющегося щадящей моделью регистрации болевой чувствительности). Учитывая тот факт, что у грызунов болевой порог в течение суток варьирует (Golombek, 1991; Ebadi et al., 1998), эксперименты проводились в одно и то же время светлой половины суток (с 9.00 до 11.00 часов) (за исключением 10-ой серии экспериментов по изучению влияния ЭМИ КВЧ на циркадианную ритмику болевой чувствительности).

Крыс содержали в условиях вивария при температуре 18 – 22оС на стандартном пищевом рационе и в стандартных условиях освещения (12 часов темнота: 12 часов свет). Световая фаза начиналась в 7.00 утра. При проведении экспериментов придерживались «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных».

Эксперименты проводились с соблюдением принципов «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986) и Постановления первого национального конгресса по биоэтике (Киев, 2001).

Автор —  Джелдубаева Эльвиза Рашидовна

Метки: