Розрідження сперми

Сперму розріджують, щоб збільшити її об’єм і осіменити більшу кількість самок, а також, щоб підтримати її запліднювальну здатність протягом усього строку зберігання.

При використанні нерозрідженої сперми одним еякулятом можна штучно осіменити 20–25 корів (по 0,2–0,5 мл на самку), 10–15 овець (об’єм дози – 0,05–0,1 мл), 3–4 кобили (по 20–25 мл). Після застосування розрідження еякуляту бугая можна осіменити до 500 корів і телиць; еякуляту барана – 20–30 вівцематок; еякуляту кнура – 8–12 свиноматок; еякуляту жеребця – 10–15 кобил.

Розріджену сперму, залежно від типу синтетичного середовища і методу зберігання, можна використовувати протягом кількох років.

Плазма сперми, яка складається переважно із секрету придаткових залоз, полегшує еякуляцію, активує спермії, сприяє їх переміщенню в статевих шляхах самки. Однак при зберіганні сперміїв поза організмом активація їх приносить шкоду через невиправдані витрати енергетичних ресурсів сперміями. Крім того, при зберіганні в спермі бугая і барана накопичується молочна кислота, яка згубно діє на статеві клітини.

Тому середовище для розрідження сперми має відповідати таким вимогам:

– збільшувати об’єм еякуляту (бідистильована вода, молоко);

– гальмувати обмінні процеси в сперміях з метою подовження строку їх зберігання (застосування двооксиду вуглецю, органічних кислот, хелатону);

– забезпечувати спермії речовинами для метаболічних процесів (цукри — неелектроліти і глюкоза, лактоза, глікокол, гліцин, мед);

– створювати оптимальні умови для сперміїв (буферні розчини і мінеральні речовини, лимоннокислий натрій, солі з багатовалентними аніонами, фосфатний буфер, трис-буфер, N-трисметил-2-аміноетан сульфанілова кислота, двонатрієва сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕДТА, хелатон 3, трилон В);

– підвищувати стійкість сперміїв до швидкого охолодження або заморожування (жовток курячого яйця, який містить 7 % лецитину, ліпопротеїди, гліцерин);

– містить антибактеріальні речовини для попередження розвитку мікроорганізмів (стрептоцид білий розчинний, пеніцилін, стрептоміцин або комплексний препарат “Спермосан-3”);

– підвищувати заплідненість самок (гіалуронідаза, простагландин F2α, рилізинг-гормон, ЛГ).

Середовища для розрідження сперми повинні мати певні фізико-хімічні властивості і таку концентрацію компонентів, при якій підтримуються необхідний осмотичний тиск і певний рівень кислотності. Підвищена кислотність або лужність призводять до загибелі статевих клітин, тому до складу синтетичного середовища можуть входити лише слабкі кислоти і незначна кількість лугів. Розчинники також не повинні містити солей багатовалентних металів (свинцю, олова), а також різних отруйних і ароматичних речовин, які згубно діють на сперміїв.

При розрідженні сперми необхідно дотримуватись таких санітарно-гігієнічних правил:

– використовувати чистий стерильний посуд;

– готувати синтетичне середовище перед розведенням не більше ніж за 3 години до його використання, а сперму розводити протягом 10 хвилин після отримання еякуляту;

– температура розріджувача повинна відповідати температурі сперми, яку розбавляють;

– для синтетичного середовища слід використовувати лише дистильовану або бідистильовану воду;

– при розрідженні середовище необхідно приливати тонкою цівкою до сперми;

– усі компоненти розріджувача слід точно відважувати.

Курячі яйця для отримання жовтка ретельно миють щіткою, протирають спиртовим тампоном, розколюють надвоє, зливають білок у банку, а жовток в оболонці обережно переносять на стерильний аркуш фільтрувального паперу. Щоб звільнити жовтковий мішок від залишків білка, його перекочують на папері. Потім стерильним скальпелем проколюють оболонку жовтка і зливають його в стерильну мензурку, а плівка залишається на папері.

При приготуванні розріджувача в стерильну хімічну колбу наливають необхідну кількість дистильованої (бідистильованої) води і добавляють точні наважки компонентів відповідно рецепту, окрім жовтка, антибіотиків і гліцерину. Розмішують середовище похитуванням посуду до повного розчинення препаратів. Потім середовище кип’ятять 5–7 хвилин у водяній бані і після охолодження до 40–45 °С вносять у нього жовток курячого яйця, антибіотики і гліцерин.

Для приготування молочного середовища для сперми бугая використовують свіже молоко від здорової корови на 2–5-му місяцях лактації, а для сперми жеребця – молоко кобили. Перед застосуванням молоко проціджують через марлевий фільтр у скляну колбу і підігрівають до кипіння, знову проціджують через стерильну марлю, охолоджують до температури 30–35 °С, а потім додають інгредієнти згідно рецепту і жовток курячого яйця. На кожні 100 мл середовища додають 20 мл жовтка. Якщо розбавлену сперму використовують для осіменіння без попереднього зберігання при зниженій температурі, то вказаний компонент можна не застосовувати.

Таблиця 5.2.3 – Склад глюкозо-цитратно-жовткового середовища для розбавлення сперми самців сільськогосподарських тварин різних видів

Окрім вказаного середовища, широко застосовують інші розріджувачі, склад яких залежить від умов зберігання сперми та виду самця.

До розрідження допускається сперма бугая з рухливістю не менше 8 балів і концентрацією не менше 800 млн. сперміїв в 1 мл еякуляту. Таку сперму можна розбавляти в 10–20–50 разів. Спочатку її розбавляють безпосередньо в спермозбирачі в 1:1 – 1:2 і після 5–10-хвилинної витримки розбавляють додатково до потрібного об’єму. При цьому синтетичне середовище підливають по стінці посудини невеликими порціями з наступним нахилом змішувача в горизонтальне положення і обертанням його навколо осі після додавання кожної порції. Після розрідження при використанні всіх способів зберігання в спермодозі бугая повинно бути не менше 15 млн. сперміїв із прямолінійно-поступальним рухом, тобто рухливість повинна становити 4 і більше балів.

Сперму барана розріджують лише густу, з рухливістю не менше 9 балів. Розріджують її у 2–4 рази (1:1; 1:3) у спермоприймачі або стерильному флаконі. Після розрідження конце трація сперміїв з прямолінійно-поступальним рухом у спермодозі повинна становити не менше 80 млн сперміїв в 1 мл.

Сперму кнура розріджують середовищем при рухливості не менше 8 балів і концентрації не менше 100 млн сперміїв. Розрідження еякуляту проводять у 2–10 разів у стерильній колбі. Перед осіменінням свиноматок можна провести додаткове розрідження, але так, щоб в 1 мл сперми було не менше 30 млн сперміїв, а в дозі – не менше 3 млрд статевих клітин.

Сперму жеребця допускають до розрідження з рухливістю не менше 6 балів і з концентрацією не менше 150 млн сперміїв в 1 мл сперми. Її можна розбавляти в 3–4 рази (1:2; 1:3), але так, щоб кількість сперміїв у дозі становила 3 млрд і більше.